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LRG-47对日本血吸虫感染抗性调节的研究

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毕业论文范文题目：LRG-47对日本血吸虫感染抗性调节的研究，论文范文关键词：LRG-47对日本血吸虫感染抗性调节的研究
LRG-47对日本血吸虫感染抗性调节的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：_p47GTP酶家族是目前在脊椎动物中发现的分子量最小也是数量最多的干扰素(IFN)反应性GTP酶家族,已经克隆了小鼠_p47GTP酶家族中的六个成员,分别是LRG-47、GTPI、IGTP、IRG-47、IIGP和TGTP/Mg21。研究发现,_p47GTP酶能够特异地参与抵抗胞内细菌和原虫的感染,对病毒的清除能力较弱~[1-7]。虽然同属于_p47GTP酶家族,但不同成员所表达的抗力具有病原体和时相特异性的特点。_P47GTP酶家族因其成员所具有特异性防御病原体的能力而引起学者的广泛关注。然而,_p47GTP酶在更为复杂的多细胞生物,例如重要的胞外寄生蠕虫—血吸虫感染中的作用知之甚少。本实验室前期研究发现~[8],_p47GTP酶随日本血吸虫感染进程,信号强度呈下调趋势,且家族中各成员的表达强度存在明显差异。我们的前期研究还发现~[9],在日本血吸虫感染6周(w)后,IGTPKO小鼠和IRG-47KO小鼠在感染/致病结局、整体/局部的免疫应答等方面均存在较大的差异。这提示不同_p47GTP酶不仅参与胞内生物的感染,亦参与胞外多细胞生物的感染,而且各成员在多细胞生物感染中的作用可能不尽相同。日本血吸虫属吸虫纲的多细胞无脊椎动物,能引起宿主复杂的感染免疫应答,可作为多细胞生物研究的重要的生物模型之一。因此,对日本血吸虫感染/致病机制的深入研究,既能为我国今后血吸虫病的防治提供理论基础,更能扩展感染免疫学的基本知识。大量文献已报道p47GTP酶家族成员LRG-47在多数胞内感染中具有明确的抗感染作用,但是对胞外血吸虫感染的作（此处忽略..）用却不明确。本研究采用lrg47基因敲除小鼠建立日本血吸虫急性感染模型,较为系统地观察LRG-47在日本血吸虫急性感染/致病阶段所诱导的宿主免疫应答特点,以进一步深化血吸虫的感染免疫学,为血吸虫病疫苗研制提供理论基础。本研究采用lrg47基因敲除(LRG-47KO)与野生型C57BL/6J(wild-type,WT)小鼠,建立日本血吸虫自然感染的小鼠模型。为观察感染/致病结果,在感染后6w通过胸主动脉灌注法计数成虫数、消化肝脏计数虫卵数、以及计算每克肝卵数和每对成虫产卵数;以HE染色观察肝脏的病理变化。为观察感染后宿主的免疫应答特征,以间接ELISA法检测小鼠血清中日本血吸虫特异性IgG抗体水平;以双抗夹心ELISA法检测脾脏单个核细胞培养上清中Th1/Th2型细胞因子的表达水平;以流式细胞术检测脾脏中主要免疫细胞的比例变化;采用基因芯片技术,比较分析感染后6w小鼠脾脏单个核细胞中表达基因的转录水平,并对信号强度发生2倍及以上变化的差异基因进行GO分类及pathway的显著性分析。为观察基因敲除后对巨噬细胞功能的影响,以间接ELISA法检测脾巨噬细胞培养上清中TNF-α的表达水平;以硝酸还原酶法检测培养上清中NO的水平;以RT-PCR法检测脾巨噬细胞中tnfα和inos的转录水平。最后,采用虫源性抗原SEA免疫小鼠,以间接ELISA法检测小鼠血清中日本血吸虫特异性IgG抗体,脾脏单个核细胞培养上清中Th1/Th2型细胞因子的表达水平,以及流式技术检测脾脏中主要免疫细胞的比例变化。本研究获得如下（略..）主要结果:1、日本血吸虫感染后6w,LRG-47KO小鼠卵荷显著少于WT小鼠,且肝脏肉芽肿反应较轻。日本血吸虫感染后6w,LRG-47KO组小鼠体内的成虫数与正常野生型小鼠相当,而LRG-47KO小鼠的肝脏虫卵数、每克肝卵量以及每对成虫产卵数显著低于WT组。肝脏中的虫卵肉芽肿大多为急性期肉芽肿,可见在虫卵周围,大量炎症细胞浸润,LRG-47KO组平均肉芽肿面积和组成细胞数显著小/少于WT组。2、日本血吸虫感染后3w和6w,就抗原特异性IgG抗体而言,LRG-47KO小鼠血清中SEA特异性IgG抗体水平显著低于WT小鼠。随着日本血吸虫感染的进行,小鼠血清中可溶性成虫抗原(SWAP)和可溶性虫卵抗原(SEA)诱导的特异性IgG抗体持续升高。但在感染后3w和6w,LRG-47KO组与WT组SWAP特异的IgG抗体水平均无显著性差异。而LRG-47KO组小鼠血清中SEA特异性IgG抗体水平均显著低于WT组。3、日本血吸虫感染后6w,LRG-47KO小鼠的CD4+T细胞的功能被削弱。脾脏单个核细胞经虫源性抗原SWAP、SEA和有丝分裂原ConA刺激后,培养上清中细胞因子水平显示:ConA与SEA刺激下,LRG-47KO小鼠的IFN-γ水平显著低于WT小鼠;在SWAP刺激下,LRG-47KO小鼠的IL-4水平显著低于WT小鼠;但在SEA刺激下,LRG-47KO小鼠的TNF-α和IL-10水平显著高于WT小鼠。感染后6w脾中主要免疫细胞的比例为:脾中B细胞、NK细胞和巨噬细胞的比例在LRG-47KO小鼠和WT小鼠两组之间无统计学差异;主要行使特异性（文章此处忽略..）细胞免疫应答功能的T细胞亚群:Tc1和Treg细胞的比例在LRG-47KO小鼠显著高于WT小鼠;Th1细胞、Th2细胞和Tc2细胞的比例在LRG-47KO小鼠显著低于WT小鼠。4、采用高通量基因芯片技术分析比较日本血吸虫感染后6w脾脏单个核细胞基因转录水平的差异,发现LRG-47KO小鼠中与免疫杀伤功能相关的基因被显著上调。与WT小鼠相比,在感染后6w的LRG-47KO小鼠脾细胞中,有780个基因信号强度增强2倍以上,866个基因信号减弱2倍以上。对差异基因的GO分类及pathway的显著性分析发现,差异基因及参与的通路主要涉及免疫杀伤相关基因及通路。5、日本血吸虫感染后6w的巨噬细胞应答:lrg47基因缺失后,不影响巨噬细胞中炎症因子NO和TNF-α的产生潜能。在日本血吸虫感染后6w,不论是LPS刺激,还是SEA刺激,LRG-47KO小鼠巨噬细胞产生的TNF-α和NO水平与WT小鼠均无显著性差异;tnf-α和inos基因的转录水平在两组小鼠脾巨噬细胞亦无显著性差异。6、SEA免疫后宿主免疫应答状况:LRG-47KO小鼠血清SEA特异性IgG抗体水平明显低于WT小鼠;在SEA刺激下脾单个核细胞分泌TNF-α、IL-4和IL-10水平显著增高。日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫小鼠后,小鼠血清中SEA特异的IgG抗体持续升高;在免疫后3w,LRG-47KO组小鼠血清中SEA特异性IgG抗体水平显著低于WT组。脾脏单个核细胞经虫源性抗原SEA或有丝分裂原ConA刺激后,培养上清中细胞因子水平显示:在SEA刺激下,LRG-47KO小鼠与（略..）WT小鼠的IFN-γ水平无显著的统计学差异,TNF-α、IL-4和IL-10水平显著高于WT小鼠;在ConA刺激下,LRG-47KO小鼠的IFN-γ水平显著低于WT小鼠,TNF-α水平两组之间无显著性差异,IL-4的水平显著高于WT小鼠,IL-10的水平虽高于WT小鼠,但无统计学差异。7、SEA免疫小鼠后脾脏中主要免疫细胞的比例:SEA免疫后3w,LRG-47KO小鼠的B细胞、Th1细胞和Tc2细胞的比例显著低于WT小鼠;LRG-47KO小鼠的Th2细胞和Tc1细胞比例略低于WT小鼠,但无统计学差异。综上,日本血吸虫感染后,与野生型小鼠相比,LRG-47信号缺失导致肝脏沉积的虫卵及每对成虫产卵量显著下降,肝脏肉芽肿反应较轻;LRG-47信号缺失增强TNF-α和IL-10的表达能力,显著上调免疫杀伤效应分子颗粒酶家族和TNF家族,增强杀伤细胞的免疫杀伤功能,这可能是导致LRG-47信号缺失小鼠低卵荷的重要因素。本研究结果提示LRG-47不仅参与了胞内生物感染,也参与胞外多细胞生物(如日本血吸虫)感染的抗性形成与调节。LRG-47在日本血吸虫感染过程中起负性调节作用。

以上为本篇毕业论文范文LRG-47对日本血吸虫感染抗性调节的研究的介绍部分。

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