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APA微囊化hBMP-2在强力霉素调控下的表达

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毕业论文范文题目：APA微囊化hBMP-2在强力霉素调控下的表达，论文范文关键词：APA微囊化hBMP-2在强力霉素调控下的表达
APA微囊化hBMP-2在强力霉素调控下的表达毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:研究APA微囊对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的生长分化性状的影响,应用APA微囊技术将含有目的基因hBMP-2和Tet-On调控表达系统的BMSCs包裹后,在DOX诱导下调控表达hBMP-2蛋白,并证实所诱导表达的hBMP-2蛋白具有生物活性。为解决可调控hBMP-2基因治疗骨缺损时,腺病毒载体转染异种或异属种子细胞移植所引起的免疫排斥反应提供实验支持。方法:1.将Adeno-X-TRE-hBMP-2质粒转化感受态大肠杆菌中进行扩增。提取质粒,鉴定质粒后,用PacI内切酶消化构建线性化的Adeno-X-TRE-hBMP-2DNA片段。2.用Lipofectamine2000将线性化Adeno-X-TRE-hBMP-2DNA片段转染HEK293包装细胞,获得有感（文章此处忽略..）染能力的重组腺病毒颗粒。3.BDAdeno-XTRE-βgalControlVirusStock和BDAdeno-XTet-OnVirusStock感染HEK293包装细胞扩增病毒;TCID50法(tissuecultureinfectiousdose50,TCID50法)测定病毒滴度。4.通过对照组Adeno-XTRE-βgal与Adeno-XTet-On病毒上清共感染BMSCs测定不同MOI值对应的吸光度,推测最佳MOI值。5.分离培养BMSCs细胞,然后消化、传代、冻存第二代BMSCs细胞备用。6.微囊化未转染的BMSCs细胞,并在微囊化后不同的时间点分别用荧光素二乙酸酯/溴化乙啶染色法(FDA/EB双染色法)测定微胶囊内细胞存活率及破囊后BMSCs细胞的生长（略..）分化特性。7.在最佳MOI条件下,用重组的Adeno-X-TRE-hBMP-2与Adeno-XTet-On病毒上清共感染BMSCs,用高压静电微囊发生仪将共感染的BMSCs包裹在APA微囊中,形成hBMP-2-BMSCs-微囊复合体。8.分别用含浓度为1.0ug/ml、10ug/ml、100ug/ml、200ug/ml和300ug/ml的DOX培养液诱导hBMP-2-BMSCs-微囊复合体表达hBMP-2,然后通过WESTERNBLOTING法检测hBMP-2的表达并进行半定量,用ELISA法检测hBMP-2表达量与DOX诱导浓度与之间。9.对DOX浓度为1.0ug/ml时所分泌的hBMP-2诱导BMSCs成骨,用茜素红染色。结果:1.酶切后凝胶电泳实验验证条带大小为2828bp的hBMP-（略..）2基因片段。2.成功构建线性化重组Adeno-X-TRE-hBMP-2载体DNA片段。3.获得较高滴度的Adeno-X-TRE-hBMP-2病毒颗粒,检测病毒滴度为3.2×108pfu/ml。4.扩增大量的BDAdeno-XTRE-βgalControlVirusStock及BDAdeno-XTet-OnVirusStock病毒颗粒,检测滴度相同为1.0×108pfu/ml。5.成功分离、纯化、扩增BMSCs,APA微囊化BMSCs后细胞生长分化未改变,APA微囊内细胞存活率为70%-80%;破囊后细胞具有成骨潜力。6.检测得到最佳MOI=60pfu/cell。7.在DOX的诱导下BMSCs-APA微囊复合体表达hBMP-2:1)DOX在1.0ug/ml到200ug/ml浓度范围内,随着浓度的增加,h（本文此处忽略..）BMP-2表达量增加。2)DOX为300ug/ml时,hBMP-2表达量有所下降。8.成功运用BMSCs-APA微囊复合体所表达的hBMP-2诱导BMSCs成骨。结论:BMSCs细胞在APA微囊内存活良好,破囊以后其干细胞的生长分化特性未发生改变。在APA微囊内的hBMP-2修饰的BMSCs可在DOX诱导下实现hBMP-2高表达,DOX诱导浓度与hBMP-2表达呈剂量依赖关系,并证实在表达于细胞培养液的hBMP-2蛋白具有生物活性。

以上为本篇毕业论文范文APA微囊化hBMP-2在强力霉素调控下的表达的介绍部分。

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