滚压载荷促进关节软骨体外构建的初步研究

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滚压载荷促进关节软骨体外构建的初步研究

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毕业论文范文题目：滚压载荷促进关节软骨体外构建的初步研究，论文范文关键词：滚压载荷促进关节软骨体外构建的初步研究
滚压载荷促进关节软骨体外构建的初步研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:对兔膝关节软骨细胞进行体外琼脂糖凝胶滚压培养;探讨滚压载荷对软骨组织体外构建的可行性。方法:1细胞培养及鉴定:无菌条件下取四周龄健康新西兰白兔双膝关节软骨,应用分阶段酶消化法,分离提取软骨细胞,20%胎牛血清的HG-DMEM作为细胞培养基,在37℃、体积分数为5%的CO2及饱和湿度条件下培养,每3天换液一次。取第3代软骨细胞,进行甲苯胺蓝、番红O-固绿、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,以用作对软骨细胞的初步鉴定。2以分离提取的兔膝关节软骨细胞为种子细胞,以琼脂糖凝胶为支架,构建细胞（略..）/支架复合体。将细胞/支架共同培养48小时后,电镜观察支架内软骨细胞的黏附、生长情况。设置实验组A(8例)和对照组B(8例),实验组滚压动态加载培养(每天定时滚压加载20min),对照组正常体外静态培养。4周后观察标本大体形态,并对实验组和对照组进行HE染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,应用Image-proplus对Ⅱ型胶原免疫组织化学染色切片行Ⅱ型胶原半定量分析。结果:1细胞形态学观察和鉴定:原代培养的软骨细胞贴壁较慢,24-36小时才开始贴壁变形。其外形多为多边形,胞浆丰富,胞核圆形,居中（本文此处忽略..）,有2-3个清晰可见的核仁。细胞长成一片时呈明显的铺路石状外观,与长梭形的成纤维细胞较易区分。首次传代细胞死亡略多,生长较慢,细胞呈梭形、多角形等多种形态。随着传代次数的增加,渐渐细胞以三角形、长梭形为主,出现集落生长倾向。取第3代细胞进行鉴别染色,甲苯胺蓝染色呈现蓝紫色,番红O/固绿染色出现典型的胞核黑色,胞浆绿色,软骨组织红色。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈现棕黄色。2电镜观察和免疫组织化学检测:实验组细胞/支架复合体较对照组表面更光滑,有光泽,周围有瓷白色半透明分（此处忽略..）泌物。凝胶细胞复合物滚压加载培养48小时后电镜下可见部分细胞已呈现梭形黏附在支架空隙中。4周后可见细胞体积增大,胞浆丰富,并分泌大量基质,细胞之间形成一定连接,具有生物学活性。HE染色发现,实验组软骨细胞在支架内增殖旺盛,软骨细胞呈圆形,排列紧密,被大量细胞外基质包围,融合成片。对照组软骨细胞增殖较弱,细胞排列稀疏,分泌的软骨基质较少,未融合成片。Ⅱ型胶原免疫组织化学检测发现,各组均有阳性染色,但实验组较对照组染色深、染色面积大。采用图像分析系统对棕黄色面积行染色（此处忽略..）面积计数,实验组阳性染色的面积为(60.67士6.41)%,对照组为(19.92士2.34)%,两者差异有统计学意义(P0.01)。结论:在琼脂糖凝胶中培养的关节软骨细胞具有典型的软骨细胞特性,在滚压载荷培养下,能够正常合成细胞外基质,并形成具有一定弹性和抗压缩能力的软骨样凝胶块。滚压载荷刺激软骨细胞分泌Ⅱ型胶原,可以作为软骨组织体外构建的适当环境,但具体机制及作用尚需今后深入研究。

以上为本篇毕业论文范文滚压载荷促进关节软骨体外构建的初步研究的介绍部分。

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