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ASC-J9对稳定转染TDP-43的NSC34细胞的作用

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毕业论文范文题目：ASC-J9对稳定转染TDP-43的NSC34细胞的作用，论文范文关键词：ASC-J9对稳定转染TDP-43的NSC34细胞的作用
ASC-J9对稳定转染TDP-43的NSC34细胞的作用毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：神经母细胞瘤与12-14天的胚胎期脊髓运动神经元杂交,形成了运动神经元样细胞系(NSC)。NSC34具有了运动神经元的特征:产生动作电位,表达神经丝,合成和释放乙酰胆碱等。另外,NSC34诱导了共培养肌肉细胞的乙酰胆碱受体,以及在培养成熟过程中经历了微波蛋白到神经丝的转变。这样既克服了原代运动神经元培养的费时、费力、花费高等不足,又保留了原代运动神经元的特征,是研究肌萎缩侧索硬化(ALS)的常用细胞株。TDP-43(43-kDaTARDNA-bindingdomainprotein)是一种在额颞叶变性和ALS病人的泛素阳性包涵体内的主要组成成分,然而TDP-43明显聚集的机制仍不清楚。TDP-43正常存在于细胞的胞核内,但是在死于ALS病人的中枢神经系统中,TDP-43由胞核内转移至了胞质,并以弥散分布或者存在于泛素阳性的包涵体内。虽然,TDP-43在ALS病人中广泛存在,但是它的一些确切机制仍不很清楚。例如,Mackenzie等人研究发现,异常分布的TDP-43广泛存在于大多数散发性肌萎缩侧索（此处忽略..）硬化(SALS)和家族性肌萎缩侧索硬化(FALS)病人中,但在SOD1突变的FALS病人中却没有发现。同样,Robertson等人在2例由SOD1突变导致的FALS病人中虽然发现泛素阳性的包涵体但没有找到TDP-43。提示TDP-43的异常可能和SOD1基因突变的发病机制不同。近年在不同的SALS和FALS中先后发现了TARDBP(transactiveresponseDNAbindingprotein)基因的30种突变。目前有证据显示,TARDBP基因很可能是继SOD1基因后发现的又一种ALS的高突变基因。TARDBP基因位于人类1号染色体1p36.2上,序列高度保守,广泛表达于多种组织。其6个外显子编码TDP-43蛋白(TAR-DNAbindingprotein)。TDP-43在基因的表达调控方面起着重要作用,包括:通过富含甘氨酸的C′末端与核内不均一核糖核蛋白家族成员结合从而影响外显子跳跃拼接、抑制剪接活性;与运动神经元生存蛋白作用为核体提供支架;参与调节mRNA稳定性、microRNA的生（略..）物合成、细胞凋亡和分裂;可能是调节神经元可塑性的神经元活性反应因子等。因此,目前对TDP-43在ALS中作用的研究越来越多。本课题在稳定转染TDP-43的基础上,加入ASC-J9观察其对细胞LDH和MDA的影响,以了解其对稳定转染不同TDP-43细胞的作用。第一部分稳定转染TDP-43的NSC34细胞系的培养及其MDA的变化目的:探索稳定转染TDP-43的NSC34细胞系的培养方法及其MDA变化,为进一步研究TDP-43在ALS中的作用创造条件。方法:参照运动神经元样细胞株的培养程序,将本实验室现有的稳定转染TDP-43的NSC34细胞系进行复苏、传代、消化、冻存等,观察其生长和增殖变化。并观察转染不同TDP-43的NSC34细胞系的MDA的水平。结果:成功培养了稳定转染Emptyvector、TDP-43Widetype、TDP-43Q331K、TDP-43M337V四个NSC34细胞系,倒置显微镜下观察细胞生长状态良好。稳定转染TDP-43Q331K细胞系较稳定转染Emptyvector细胞系MDA显著增高,具有统计学意义（此处忽略..）(P0.01);稳定转染TDP-43Widetype和TDP-43M337V细胞系较Emptyvector细胞系MDA显著增高,具有统计学意义(P0.05)。结论:稳定转染的四个细胞系可以作为研究TDP-43在ALS中作用的一种体外模型;稳定转染TDP-43Widetype、TDP-43Q331K、TDP-43M337V三个细胞系较Emptyvector细胞系表现出了显著的脂质过氧化,间接反映其细胞损伤程度更明显。第二部分ASC-J9对稳定转染TDP-43的NSC34细胞系的影响目的:研究ASC-J9对稳定转染不同TDP-43的NSC34细胞系的作用,为进一步研究ASC-J9对ALS的作用创造条件。方法:在成功培养稳定转染TDP-43的NSC34细胞基础上,于传代24小时后进行换液,待细胞恢复6-12小时后,将细胞随机分为对照组和ASC-J9干预组,对照组给予含10%胎牛血清的普通培养液,ASC-J9干预组分别给予ASC-J90.1、1和5μmol/L作用24小时,作用完全后收集各组培养液及细胞,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,测定细胞中丙二醛(MDA)的含量。结（此处忽略..）果:稳定转染TDP-43的NSC34细胞系在给予ASC-J90.1、1和5μmol/L作用24小时后,倒置相差显微镜下观察,各组细胞形态未见明显变化。给予ASC-J90.1μmol/L作用24小时后,细胞的MDA、LDH未见明显变化,给予ASC-J91、5μmol/L作用24小时后,细胞的MDA、LDH较未对照组明显下降,具有统计学意义(P0.01)。结论:ASC-J9可明显降低细胞的MDA和LDH,对于抵抗细胞的脂质过氧化损伤发挥了一定作用。ASC-J9在ALS等神经变性疾病的防治上具有一定的应用前景。

以上为本篇毕业论文范文ASC-J9对稳定转染TDP-43的NSC34细胞的作用的介绍部分。

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