RNAi特异性抑制人RA成纤维样滑膜细胞IL-1RI基因表达的研究

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RNAi特异性抑制人RA成纤维样滑膜细胞IL-1RI基因表达的研究

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毕业论文范文题目：RNAi特异性抑制人RA成纤维样滑膜细胞IL-1RI基因表达的研究，论文范文关键词：RNAi特异性抑制人RA成纤维样滑膜细胞IL-1RI基因表达的研究
RNAi特异性抑制人RA成纤维样滑膜细胞IL-1RI基因表达的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:构建以慢病毒介导的RNAi体系,抑制人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞IL-1RI的表达,为人类风湿关节炎的研究打下基础。方法:1.人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的体外培养和鉴定:于行膝关节置换术、关节镜术的类风湿关节炎病人膝关节取病变的滑膜组织,采用组织块培养法和酶消化法进行体外培养。在两种方法中,均将滑膜组织处理成实验所需组织块,组织块培养法中直接将处理好的组织块平铺于培养瓶底,消化法中则采用Ⅱ型胶原酶及胰酶对处理好的组织块进行消化。倒置显（文章此处忽略..）微镜下观察细胞的生长状况。流式细胞仪检测培养的第四代人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,分别以抗人CD3mAb、抗人CD19mAb、抗人CD16mAb、抗人CD56mAb、抗人CD14mAb、抗人CD55mAb、抗人CD90mAb对细胞进行间接免疫荧光染色,同时设同型阴性对照。沈涤后上机检测,采用Cell-Quest软件分析。2.IL-1RIsiRNA慢病毒载体系统的构建及干扰IL-1RI基因表达:根据所选定IL-1RI基因序列,利用在线软件设计3条IL-1RI基因片段特异性干扰序列。（文章此处忽略..）进行dsOligo的合成后,将其与U6载体进行连接,转化入大肠杆菌感受态细胞,进行克隆,利用氨卞霉素抗性进行阳性克隆筛选后外送公司测序。构建LentiviralVector介导的IL-1RIsiRNA的RNAi系统转染FLS细胞,提取IL-1RI的RNA,RT-PCR检测瞬时转染后IL-1RIsiRNA对IL-1RI基因表达的抑制效果。结果:1.本实验四例患者滑膜组织标本均以组织块培养法成功培养出FLS,平均可传至第八代,其中两例患者滑膜组织同时采用消化（文章此处忽略..）法培养,结果良好,相比组织块培养法来说所用时间较短,两种方法培养的滑膜细胞均可传至第8代。第3～7代细胞增殖活跃,生长情况稳定,8代开始细胞增长缓慢逐渐老化。流式细胞仪检测,第四代细胞纯度高达99%以上,CD90~+以作为FLS的细胞表面标记。2.设计的三组IL-1RI基因片段特异性干扰序列,2组与3组转化入感受态细胞阳性克隆筛选后与设计序列相符。第3组成功构建出LentiviralVector介导的IL-1RIsiRNA的RNAi系统慢病毒载体系统,RT-PCR检测,第（此处忽略..）3组序列对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞IL-1RI的表达有明显的抑制效果。结论:1.成功培养出人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,建立其体外培养技术平台。2.成功构建LensiviralVector介导的IL-1RIsiRNA的RNAi系统,此体系对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞IL-1RI基因表达有明显的抑制效果,为研究人类风湿关节炎的基因治疗进行了有益的探索。

以上为本篇毕业论文范文RNAi特异性抑制人RA成纤维样滑膜细胞IL-1RI基因表达的研究的介绍部分。

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