人胰岛素原基因在小鼠乳腺中特异性表达

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人胰岛素原基因在小鼠乳腺中特异性表达

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毕业论文范文题目：人胰岛素原基因在小鼠乳腺中特异性表达，论文范文关键词：人胰岛素原基因在小鼠乳腺中特异性表达
人胰岛素原基因在小鼠乳腺中特异性表达毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：人胰岛素(Humaninsulin)是人胰岛β细胞分泌的一种蛋白类激素，目前的市场需求很大，而市售的胰岛素多为动物胰岛素。本研究就是探讨人胰岛素在动物乳腺生物反应器生产的可行性。研究用高保贞Taq酶通过PCR方法从正常人的基因组DNA中扩增出1182bp的人胰岛素原基因，运用TA克隆的方法将扩增片段插入PGEM-T-easy载体中，在Genebank中全序列分析（本文此处忽略..）表明扩增出的hINS与其中一个发表序列完全吻合，而与另外的一个发表序列同源性为99％，不同的碱基其中一处是位于内含子，其它三处位于等位多变点，这种碱基的差别可能与取样的人种有关。为了进一步验证扩增出的hINS基因能否在蛋白质水平上表达，用构建的乳腺特异性表达载体制作转基因小鼠，利用转基因小鼠作为个体表达系统来检测目标蛋白表达量。用高保贞长Taq酶通过PC（文章此处忽略..）R方法扩增出牛αS1-casein基因的6.4kb的5’端上游调控序列(包括第一外显子，第一内含子，第二外显子起始翻译密码子前的部分和5’端上游约5kb非翻译区)和1.5kb的3’端(紧接αS1-casein最后一个外显子下游的1.5kb非翻译区)，将它们按照止确的顺序连接，然后把测序正确的hINS基因序列克隆进αS1-casein基因的5’端和3’端之间，验证其为止方向插入。构建的乳腺（略..）特异性表达载体去除原核部分(αS1-casein基因调控序列+人胰岛素原基因)，显微注射小鼠受精卵雄原核，获得29只G_0代小鼠，PCR检测出其中8只为转基因刚性小鼠。检测出的PCR阳性小鼠剪取尾巴提取基因组DNA，Xhol酶切消化基因组DNA，电泳转印，用从测序正确的质粒中酶切纯化出探针，进行Southern-blot，结果其中1只小鼠Southern-blot检（此处忽略..）测呈阳性。转基因小鼠自然泌乳以后，收集到5只转基因小鼠和2只阴性小鼠的乳汁，脱脂脱酸以后，在乳清中用放射免疫检测方法检测胰岛素的表达量，结果其中两只转基因小鼠的表达量明显高于其它小鼠，表达量达到250uIU／ml和376uIU／ml，进一步的蛋白质定性和活性检测正在继续进行中。

以上为本篇毕业论文范文人胰岛素原基因在小鼠乳腺中特异性表达的介绍部分。

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