神经肽Y引起人肝细胞凋亡机制的比较蛋白组学研究

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神经肽Y引起人肝细胞凋亡机制的比较蛋白组学研究

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毕业论文范文题目：神经肽Y引起人肝细胞凋亡机制的比较蛋白组学研究，论文范文关键词：神经肽Y引起人肝细胞凋亡机制的比较蛋白组学研究
神经肽Y引起人肝细胞凋亡机制的比较蛋白组学研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：神经肽Y（NeuropeptideY，NPY）是一种由36个氨基酸组成，结构类似于鸟胰多肽（avianpancreaticpolypeptide，APP）及多肽YY（peptideYY）的一种神经递质，其丰富地表达于中枢和外周神经系统。当交感神经激活时，NPY可与去甲肾上腺素（Norepinephrine，NE）共同被交感神经末梢所释放。NPY通过六种不同的G蛋白偶联受体在体内发挥着广泛的作用。在中枢，NPY可影响学习、记忆、摄食等功能；而在外周，它对循环系统、生殖系统和消化系统均产生影响。肝脏是人体最大的腺体，是新陈代谢的重要器官。肝脏被大量的传入神经和传出神经（交感和副交感神经）所支配。研究表明，在人类肝脏中，NPY能神经元是人体肝脏中最为丰富的肽能神经元。NPY能神经元大量分布于肝动脉、门静脉以及胆道周（文章此处忽略..）围，并且直接贯穿于肝小叶，与肝细胞直接接触，从而形成一个复杂的神经网络。有研究报道交感神经能够通过末梢释放NPY和NE调节肝血管的血液量，而NPY对肝细胞的作用却鲜有报道。基于纳升级二维液相-串联质谱（2D-nano-LC-MS/MS）的鸟枪法蛋白组学研究技术是指将目标蛋白组进行酶解形成混合肽段后，采用纳升级二维液相色谱对肽段混合物进行分离，接着通过串联质谱逐一检测特征性肽段，所得数据运用SEQUEST等软件进行数据分析，从而高通量、高灵敏度和高精度地对蛋白质进行鉴定。为研究NPY对肝细胞的作用及其分子机制，我们以人肝细胞L-02为研究对象，进行了以下工作：1、采用MTT法测定不同浓度的NPY对人肝细胞L-02活力的影响。2、应用Westernblot检测NPY刺激人肝细胞L-02后凋亡标志性蛋白的变化。3、应用基于纳升级二（本文此处忽略..）维液相-串联质谱的鸟枪法蛋白组学技术研究人肝细胞L-02在经过NPY刺激后，其蛋白表达谱的变化，从中挖掘NPY引起人肝细胞凋亡的信号通路；4、应用生物信息学软件分析蛋白组数据，同时查阅文献，筛选与凋亡密切相关的蛋白，发掘NPY引起人肝细胞凋亡的可能信号通路，并应用Westernblot对部分蛋白的表达变化进行验证；5、应用mTOR的抑制剂雷帕霉素，进一步观察mTOR信号通路在NPY引起人肝细胞凋亡中的作用。主要工作结果如下：1、NPY可呈剂量依赖性明显降低人肝细胞L-02的活力，且1nMNPY即具有显著作用。2、NPY可导致L-02细胞凋亡标志性蛋白表达发生明显变化，L-02细胞在经过NPY的刺激后，其剪切caspase-3表达上调，Bcl-2家族中Bax、Bad表达上调，Bcl-2表达下调。结果显示，NPY可引起L-02细胞的凋亡。3、应用（文章此处忽略..）基于纳升级二维液相-串联质谱的鸟枪法蛋白组学研究技术，10nM的NPY刺激L-02细胞后，有317个蛋白的表达呈现差异，其中80个蛋白表达上调，237个蛋白表达下调。经过查阅筛选，与凋亡密切相关的蛋白有12个，我们关注其中的4个蛋白，即哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR），细胞色素c（cytochromec），核糖体蛋白S6激酶（S6K）和热休克蛋白70（Hsp70）。mTOR可通过激活S6K而磷酸化BAD，Hsp70可通过JNK来调节cytochromec的释放，而cytochromec则能够活化caspase-9从而剪切caspase-3，引起细胞的凋亡。4、经Westernblot的进一步验证，mTOR、cytochromec、S6K和Hsp70的表达与纳升级二维液相-串联质谱所检测的表达模式一致，mTOR、S6K、cytochromec表达上调，Hsp70表达下调（本文此处忽略..）。5、应用mTOR的抑制剂雷帕霉素后，NPY引起L-02细胞的凋亡被逆转。综上所述，NPY可呈剂量依赖地促进人肝细胞的凋亡。10nMNPY刺激L-02细胞24h后，12个与凋亡相关的蛋白发生变化，其中4个具有密切的联系，我们进一步推测mTOR/S6K/BAD、Hsp70/cytochromec/caspase-3可能是NPY引起人肝细胞凋亡的两条重要信号通路。应用mTOR抑制剂雷帕霉素后进一步表明，雷帕霉素可以逆转NPY的促人肝细胞凋亡作用。研究表明，NPY可通过激活人肝细胞内在凋亡通路而使其凋亡，同时基于纳升级二维液相-串联质谱的鸟枪法蛋白组学是一种有效的挖掘信号通路的方法。

以上为本篇毕业论文范文神经肽Y引起人肝细胞凋亡机制的比较蛋白组学研究的介绍部分。

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