人胰岛素样成长因子结合蛋白-3基因编码序列的克隆及其在大肠杆菌

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人胰岛素样成长因子结合蛋白-3基因编码序列的克隆及其在大肠杆菌

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毕业论文范文题目：人胰岛素样成长因子结合蛋白-3基因编码序列的克隆及其在大肠杆菌，论文范文关键词：人胰岛素样成长因子结合蛋白-3基因编码序列的克隆及其在大肠杆菌
人胰岛素样成长因子结合蛋白-3基因编码序列的克隆及其在大肠杆菌毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：胰岛素样成长因子结合蛋白3(IGFBP-3)是一种多功能的内分泌因子,是该家族的重要成员,是人类血液中数量最多、作用最强的IGFBP,可结合血液中95%-99%的胰岛素样成长因子-1(IGF-1)。重组人IGF-1(rhIGF-1)早已被利用于医治侏儒症,并发明IGF-1对糖尿病、神经伤害、跟骨质蓬松症也有医治作用。但已有报道证明单独利用rhIGF1医治时,可引发一些轻度跟中度不良反应,包含四肢浮肿、头疼、关节疼、下颚触痛、体位性低血压、视神经水（本文此处忽略..）肿等。IGFBP-3可使IGF-1的半衰期延长,把持IGF-1的生物利费用而使不良反应明显减少。rhIGF-1跟rhIGFBP-3合并成复合物利用,当可成为进步药效降落副作用之最佳打算。而后者也有望被开发为一种新药,并存在广泛的利用前景。与此同时多年研究确认IGFBP-3是细胞凋亡的引诱物,这一作用是独破于IGFs之外的。IGFBP-3存在促细胞凋亡、克制细胞成长、加强癌细胞的喷射敏感性等作用,IGFBP-3对成长失控细胞（文章此处忽略..）的作用机制,已成为抗肿瘤医治研究的一个新热点。而国内对IGFBP-3的研究,仅限于将其作为糖尿病、肿瘤等的标记物,而对表白纯化及功能方面的报道甚少。我实验室已成功构建了IGF-1的高效表白体系。本文目标旨在树破IGFBP-3的原核表白体系,为进一步深刻研究IGFBP-3提供前提。咱们提取人肝组织总RNA,逆转录聚合酶链反应扩增IGFBP-3的cDNA,经巢式PCR扩增得到目标片段。将其克隆入pGEM-TEasy载体。（此处忽略..）测序证明序列正确后,将目标基因插入融合型原核表白载体pQE-30Xa,将己构建好的表白载体pQE-30Xa/IGFBP-3重组质粒转化大肠杆菌M15,异丙基硫代-8-D-半乳糖苷(IPTG)引诱表白。采取亲跟层析法纯化目标蛋白。ELISA法测定rhIGFBP-3与IGF-1的结合活性。MTT法检测rhIGFBP-3对Hela细胞增殖的影响。成果SDS-PAGE可见与预期大小相符的蛋白条带,WesternBlot证明该条带即为rhIG（文章此处忽略..）FBP-3。经纯化后,用ChemiGenius凝胶成像分析体系分析,重组蛋白的纯度超过95%。生物活性研究显示它有克制Hela细胞增殖的作用,且在体外存在与IGF-1结合的活性。咱们成功树破了rhIGFBP-3的高效表白体系,rhIGFBP-3的表白量可达到菌体总蛋白量的50.2%,而且存在很好的生物学活性。

以上为本篇毕业论文范文人胰岛素样成长因子结合蛋白-3基因编码序列的克隆及其在大肠杆菌的介绍部分。

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