适配子修饰PLGA纳米粒子靶向基因载体的构建及初步应用

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适配子修饰PLGA纳米粒子靶向基因载体的构建及初步应用

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毕业论文范文题目：适配子修饰PLGA纳米粒子靶向基因载体的构建及初步应用，论文范文关键词：适配子修饰PLGA纳米粒子靶向基因载体的构建及初步应用
适配子修饰PLGA纳米粒子靶向基因载体的构建及初步应用毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景及目的在全世界范围内，前列腺癌是男性第二位的恶性肿瘤，居男性肿瘤死亡病因的第六位。近半数前列腺癌在诊断时已进入晚期，或转化为抗拒激素治疗的前列腺癌，传统治疗方法如手术、放疗、内分泌治疗和化疗等疗效欠佳，仍需要寻求安全有效的治疗措施。基因治疗是有效且序列特异性的治疗手段，可能有助于晚期前列腺癌的治疗，其中反基因技术通过三螺旋形成寡核苷酸（TFO）在靶基因局部形成DNA三螺旋从而在转录水平抑制基因的表达和细胞增殖。基因治疗的关键是选择高效的基因载体。高分子聚合物纳米粒子（NP）性能优良作为基因载体被广泛研究，但缺乏主动靶向性。适配子（Apt）因其高度特异性和亲和力，逐渐成为肿瘤靶向治疗的热点。本课题使用生物相容性好、生物可降解的聚乳酸-乙醇酸共聚物（PLGA（文章此处忽略..））及靶向前列腺特异性膜抗原的A10适配子，制备包裹TFO的靶向纳米药物TFO-NP-Apt，检测其纳米表征和药理学特性并初步探讨其体外抑制前列腺癌细胞增殖的作用，为前列腺癌提供新的治疗药物。材料和方法1、药物制备：通过酸胺缩合反应将PLGA-COOH与NH2-PEG-COOH连接生成PLGA-PEG-COOH，NH2-A10适配子与PLGA-PEG-COOH连接生成PLGA-PEG-Apt，核磁共振氢谱验证两步连接。采用双乳化溶剂挥发法制备包裹TFO的纳米药物TFO-NP-Apt。动态激光光散射法测定纳米粒子的平均粒径和分散系数，相位分析光散射技术测定表面zeta电位。扫描电子显微镜下观察纳米粒子的表面形态。核酸/蛋白分析仪间接测定TFO含量计算纳米药物对TFO的包封率和载药（文章此处忽略..）量，体外药物释放实验验证纳米药物的缓释性。2、细胞实验：制备荧光标记的TFO-NP-Apt、TFO-NP和TFO，分别在与细胞共培养后30min、1h、2h在荧光显微镜下定性评价前列腺癌LNCaP细胞（PSMA+、AR+）的摄取情况，流式细胞术定量评价细胞摄取情况。CCK-8试验设立TFO-NP-Apt、TFO-NP、TFO和NP组，24h、48h和72h组检测药物抗LNCaP增殖的量效关系和时效关系。细胞实验选用前列腺癌PC3细胞（PSMA-、AR-）作为对照组。结果1、核磁共振氢谱分别在3.3-3.9ppm和1.2-1.7ppm出现PEG和Apt的特征峰，验证了PLGA-PEG-Apt的合成；动态激光散射法结果显示制备的纳米粒子平均粒径为225.2±8.1nm（Mean±SD，n=3），分散系数为0.096±0.02，粒径分布较（本文此处忽略..）集中，zeta电位约-35.5±3.3mV；扫描电镜下观察纳米粒子呈圆形，表面光滑，粒径分布较均匀；包封率为25.4%±3.1%（n=3），载药量为1.34±0.16μg/mg；TFO-NP-Apt的释放呈现突释之后的持续缓释过程。2、细胞摄取实验中，每个时间段（30min、1h、2h）LNCaP对TFO-NP-Apt的摄取都明显好于TFO-NP和TFO，LNCaP对TFO-NP-Apt的摄取明显好于PC3。流式细胞术定量地验证，随着时间的延长，LNCaP对TFO-NP-Apt的摄取逐渐增多（p均0.001）。CCK-8试验表明，TFO-NP-Apt能较好地抑制LNCaP的增殖，这一效果优于TFO-NP和TFO（p0.001）；并且随着时间的延长或剂量的增加，TFO-NP-Apt抗LNCaP增殖的作用逐渐增强（p=0.004、p0.001）。N（本文此处忽略..）P不表现抑制细胞增殖的作用。各时间段，TFO-NP-Apt、TFO-NP、TFO抗LNCaP增殖的作用都强于抗PC3的增殖(p0.05)。结论1、本课题成功制备了A10适配子修饰的PLGA纳米基因药物TFO-NP-Apt。纳米粒子表征理想；载体对基因治疗药物TFO的包封率、载药量理想；药物缓释性较好。2、在细胞水平验证了纳米药物抗前列腺癌细胞增殖的作用。TFO-NP-Apt提高了LNCaP细胞的药物摄取率，增强了抑制LNCaP细胞增殖的作用，并且其抗增殖作用呈现良好的时效关系和量效关系。

以上为本篇毕业论文范文适配子修饰PLGA纳米粒子靶向基因载体的构建及初步应用的介绍部分。

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