淋巴细胞来源的儿茶酚胺对T辅助细胞分化的影响

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淋巴细胞来源的儿茶酚胺对T辅助细胞分化的影响

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毕业论文范文题目：淋巴细胞来源的儿茶酚胺对T辅助细胞分化的影响，论文范文关键词：淋巴细胞来源的儿茶酚胺对T辅助细胞分化的影响
淋巴细胞来源的儿茶酚胺对T辅助细胞分化的影响毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的：随着神经—内分泌—免疫相互作用研究的不断深入,人们发现大鼠和人的免疫细胞均能表达酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH)即儿茶酚胺(catecholamine,CAs)合成的限速酶,随后的研究也证实了淋巴细胞自身能分泌儿茶酚胺,并对淋巴细胞的增殖和凋亡产生影响,并在此基础上初步探讨了其作用机制。T淋巴细胞是高度异质性的群体,CD4+T细胞是T细胞中最多的一类亚群,本课题以CD4+T细胞为研究对象,探讨CD4+T细胞自身分泌的儿茶酚胺对于Th细胞分化的影响,从而为神经—内分泌—免疫调节网（文章此处忽略..）络增加新的内容。方法：取小鼠肠系膜淋巴结,常规培养淋巴细胞,用磁珠分选法分离和纯化CD4+T淋巴细胞。用逆转录—聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechaieaction,RT-PCR)法检测CD4+T淋巴细胞TH的表达。用Westernblot方法检测CD4+T淋巴细胞TH的表达。构建四个针对TH(NM_009377.1)基因的pcDNATM6.2-GW/miRNA干扰质粒,用AMAXAneucleofector技术将干扰质粒转染CD4+T淋巴细胞,应用RNA干扰技术抑制小鼠CD4+T细胞T（略..）H的表达,用(?)real-timePCR方法和western-blot方法分别检测TH基因和蛋白水平的沉默效果,高效液相色谱法-电化学检测法检测TH基因沉默后胞内CAs含量变化,用流式细胞术检测TH基因沉默后的CD4+T细胞细胞内IL-4和IFN-y的含量。结果：淋巴细胞经分离和纯化后,CD4+T细胞纯度达到98.2%,RT-PCR方法和Westernblot方法证明小鼠CD4+T淋巴细胞表达THmRNA以及TH蛋白。构建的4对针对TH基因miRNA表达载体pcDNATM6.2-GW/miRNA经测序鉴定,证明构建成功。（此处忽略..）AMAXAneucleofector技术转染pcDNATM6.2-GW/miRNA进入CD4+T淋巴细胞,转染效率达60%。实时荧光定量PCR检测小鼠CD4+T细胞转染干扰质粒后TH的干扰抑制效率,pcDNATM6.2-GW/miRNA3,pcDNATM6.2-GW/miRNA4的干扰作用可达70%左右,其中以miRNA4插入片段的抑制作用最为明显。Westernblot方法检测干扰质粒的干扰抑制效果,也达70%左右,与real-timePCR结果相一致,以pcDNATM6.2-GW/miRNA4插入片段抑制作用最为明显。高效液相色谱-电化学（略..）检测法检测结果证明TH基因沉默后CD4+T淋巴细胞胞内合成儿茶酚胺含量明显降低,流式细胞术检测细胞内细胞因子结果显示TH基因沉默,导致了CD4+T淋巴细胞胞内IL-4含量的下降,而对胞内IFN-γ的含量无明显影响,Th1/Th2比例上升。结论：小鼠CD4+T细胞能表达TH,TH基因的沉默抑制了淋巴细胞来源的CAs的合成,Th细胞来源的CAs促进Th细胞向着Th2方向分化。

以上为本篇毕业论文范文淋巴细胞来源的儿茶酚胺对T辅助细胞分化的影响的介绍部分。

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