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乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白提取跟纯化及对AA大鼠干涉作用的研究

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毕业论文范文题目:乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白提取跟纯化及对AA大鼠干涉作用的研究,论文范文关键词:乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白提取跟纯化及对AA大鼠干涉作用的研究
乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白提取跟纯化及对AA大鼠干涉作用的研究毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:研究背景类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)是以滑膜异样增生为病理特点的一种本身免疫病。RA是一种难治性疾病,无论是使疾病完全缓解、基本缓解、还是减轻疾病的活动程度,均须要长期用药。但至今尚未发明一种药物(包含甲氨喋呤、金制剂等疾病把持药物)可能完全把持病情。国内外研究者试图以各种结合用药打算来把持病情发展,曾有过“金字塔”打算,采取所谓上台阶式,即先用消炎止痛药,半年后无效再逐个增加改变病情的抗风湿药,如金制剂、青霉胺,无效再加细胞毒药物,最后用激素。但这种方法的最大毛病是利用消炎止痛药半年无效,骨质已被破坏,再用改变病情药物,对已存在的关节破坏无奈恢复。另一种是下台阶模式,即先结合用药,当前逐步减停,最后仅留一两种副作用最小的药物保持,然而毕竟那种打算才是最好的抉择,结合用药后的远期疗效如何,尚无人能断定做出答复。并且无论哪种用药方法均无奈避免病情把持药物的非特异性克制全身免疫体系所带来的副作用。生物制剂目前已经开端在国内逐步广泛利用,国内外均有其对于敏捷克制炎症跟改良RA骨质破坏的报道,但因其长期疗效察看的研究较少,增加预感之外的感染危险,价格昂贵,而限度了其临床的广泛利用。目前对RA发病机制的研究重要集中在抗原含混辨认研究方面,针对其发病机制,假如能克制T细胞针对本身抗原的免疫反应,恢复机体对裸露的本身抗原耐受,有利于医治本身免疫疾病。口服耐受(Oraltolerance,OT)指口服引起本身免疫病的蛋白类本身抗原,引诱相干免疫细胞跟细胞因子活化,克制体内针对本身抗原的免疫反应,达到医治本身免疫疾病的目标。这一保险有效便利的医治方法逐步受到国内外学者的器重。因此近20年来,OT已经成为免疫医治中的一个热点(文章此处忽略..)。OT的基本机制波及主动克制(activesuppression)、旁路克制(bystandersuppression)、克隆缺失(clonaldeletion)、克隆无能(clonalanergy)、TGF-β等克制性炎症因子的分泌以及Th1细胞因子跟Th2细胞因子之间的均衡。哪种方法在口服耐受中起安排作用在很大程度上取决于口服抗原的剂量跟品种以及本身的免疫状况。低剂量介导主动克制跟旁路克制,而高剂量介导克隆无能或缺失。近年来,口服免疫耐受已成为黏膜免疫的研究热点,并广泛用于变态反应性脑脊髓膜炎、RA、Ⅰ型糖尿病、本身免疫性甲状腺炎、实验性本身免疫性重症肌无力等本身免疫疾病的研究当中。国内外均有对于口服抗原医治本身免疫疾病的临床跟基本实验报道。Ⅱ型胶原蛋白(typeⅡcollagen,CⅡ)是人跟动物关节中含量最丰富的蛋白之一,被认为最有可能是RA的本身抗原。各物种的胶原蛋白存在高度同源性,90%左右的氨基酸序列雷同。目前国内外均有通过口服CⅡ引诱免疫耐受医治RA动物模型的研究报道,该方法简便、保险、有效,是目前研究的热点。乌梢蛇是医治关节苦楚悲伤的常用中药,乌梢蛇水煎液重要成分分析显示其含有大量的胶原物质。佐剂引诱型关节炎(adiuvantarthritis,AA)在临床表示、病理学、免疫学改变跟病理机制等方面与人RA有很多类似特点,目前较为广泛跟成熟的利用于RA的临床跟基本研究中。提取乌梢蛇有效成分,并对其AA大鼠的干涉作用机制进行初步研究,有助于咱们意识乌梢蛇医治RA的机制。目标1提取跟纯化乌梢蛇CⅡ2通过察看乌梢蛇CⅡ对佐剂引诱型关节炎模型的干涉作用的研究,对其作用机制进行初步摸索。方法1乌梢蛇CⅡ的提取跟鉴定1.1采取限度性胃蛋白酶降解法提取乌梢蛇CⅡ(文章此处忽略..);1.2SDS-PAGE凝胶电泳测定提取乌梢蛇CⅡ的蛋白分子量;1.3紫外分光光度计测定提取乌梢蛇CⅡ的紫外接收波长;1.4western-blot方法鉴定提取的乌梢蛇CⅡ;2乌梢蛇CⅡ对AA大鼠的干涉作用的研究2.1采取完全弗氏佐剂(completeFreud'sadjuvant,CFA)0.1ml足垫皮下打针引诱AA大鼠模型;2.2实验分组:乌梢蛇CⅡ体外直接作用浓度打算:空白对比组(Control)、乌梢蛇CⅡ低剂量组(lowdoses,LD)、乌梢蛇CⅡ中剂量组(middledoses,MD)、乌梢蛇CⅡ高剂量组(highdoses,HD)分辨为CⅡ0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml;灌服乌梢蛇CⅡ浓度打算:乌梢蛇CⅡ低剂量组(lowdoses,LD)、乌梢蛇CⅡ中剂量组(middledoses,MD)、乌梢蛇CⅡ高剂量组(highdoses,HD)、分辨灌服CⅡ5μg/kg、50μg/kg、500μg/kg;畸形大鼠组、AA模型组灌服0.01mol/L的冰醋酸(即CⅡ的溶剂);2.3分辨以高、中、低剂量CⅡ灌服SD大鼠模型,并设空白对比组跟AA模型组:造模后16天、20天、24天、28天察看肿胀关节,造模后28本性别滑膜、切片HE染色,察看滑膜炎症;2.4L929细胞毒性法检测TNF-α细胞毒活性,MTT法检测IL-1β细胞增殖活性;2.5ELISA法检测血清跟滑膜细胞上清液的细胞因子程度;3统计学处理:成果均用mean±SD表示,采取SPSS13.0软件进行分析,关节肿胀度评分采取反复测量方差分析方法进行统计,多组间比较采取one-wayANOVA方差分析法,方差齐时,两组比较采取LSD测验,如多组与对比组比较利用Dnutte测验,当方差不齐时,采取Welch持重估计,再采取T_2方法两两比较,P<0.05为有统计学意思成果1乌梢蛇(此处忽略..)CⅡ的鉴定1.1SDS-PAGE凝胶电泳测定的乌梢蛇CⅡ分子量约为118KD~120kD;1.2紫外分光光度计测定提取的CⅡ接收峰约为230nm;1.3western-blot测定其显影带均与标准的牛鼻中隔CⅡ相符;2乌梢蛇CⅡ对AA大鼠的干涉作用的研究2.1采取完全弗氏佐剂足厚挚下打针引诱佐剂型关节炎模型,至免疫后15d左右开端呈现对侧关节肿胀,后肢、踝关节及足部小关节呈现红肿,逐步加重,重大者浮现消瘦、脱毛、尾部肿胀等全身表示。2.2灌服乌梢蛇CⅡ对AA大鼠关节肿胀程度的影响:造模后16、20天各组关节肿胀程度无明显性差别,造模后24天、28天,中、低剂量CⅡ组动物模型关节肿胀程度得到改良(P<0.05);2.3乌梢蛇CⅡ体外对AA大鼠滑膜细胞炎症因子活性的影响:乌梢蛇CⅡ各浓度组体外对AA大鼠滑膜细胞上清液TNF-α跟IL-1β活性不直接作用;2.4乌梢蛇CⅡ体外对AA大鼠滑膜细胞跟肠凑集淋巴小结(Peyer'spatch,PP)细胞共培体系的炎症因子活性的影响:乌梢蛇CⅡ中浓度组可克制AA大鼠的滑膜细胞跟PP共培体系上清液TNF-α跟IL-1β活性(P<0.01),乌梢蛇CⅡ低、高浓度组可克制AA大鼠的滑膜细胞跟PP共培体系上清液IL-1β活性(P<0.05);2.5灌服乌梢蛇CⅡ对AA大鼠滑膜细胞炎症因子活性的影响:AA模型组与空白对比组比拟,滑膜上清液TNF-α跟IL-1β活性明显升高(P<0.01);灌服乌梢蛇CⅡ低、中剂量组与AA模型组比拟,TNF-α活性降落(P<0.05);中剂量组与AA模型组比拟,IL-1β活性降落(P<0.05);2.6灌服乌梢蛇CⅡ对AA大鼠滑膜细胞上清液炎症因子程度的影响:AA模型组与空白对比组比拟,滑膜上清液TNF-α跟IL-1β程度明显升高(P<0.01);乌梢蛇CⅡ中、高剂量作用组与AA模型组比拟,均能克制滑膜上清液TNF-α跟I(略..)L-1β程度(P<0.01);乌梢蛇CⅡ低剂量组能明显克制滑膜上清液IL-1β程度(P<0.01);乌梢蛇CⅡ中剂量组能明显升高滑膜上清液TGF-β(P<0.01):2.7灌服乌梢蛇CⅡ对AA大鼠血清炎症因子程度的影响:AA模型组与空白对比组比拟,TNF-α浓度升高(P<0.01)、IL-1β浓度明显升高(P<0.01);灌服乌梢蛇CⅡ中、高剂量组与AA模型组比拟,TNF-α浓度降落(P<0.01);灌服乌梢蛇CⅡ各剂量组与AA模型组比拟,IL-1β浓度明显降落(P<0.01);灌服乌梢蛇CⅡ中、高剂量组与AA模型组比拟,TGF-β浓度回升(P<0.01);论断1采取限度性胃蛋白酶降解法提取乌梢蛇CⅡ,经SDS-PAGE凝胶电泳、紫外分光光度计法跟western-blot法鉴定理化性质与标准的CⅡ一致,证明咱们提取的为乌梢蛇CⅡ。2灌服乌梢蛇CⅡ能改良AA大鼠关节肿胀程度跟滑膜炎症、乌梢蛇CⅡ体外对滑膜细胞炎症因子不直接作用,乌梢蛇CⅡ体外作用于AA大鼠滑膜细胞跟PP细胞共培体系跟灌服乌梢蛇CⅡ均可能克制滑膜细胞炎症因子的程度跟活性,克制血清TNF-α跟IL-1β程度跟升高血清TGF-β程度,提示乌梢蛇CⅡ是通过口服耐受机制对AA大鼠有明显的干涉作用。


以上为本篇毕业论文范文乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白提取跟纯化及对AA大鼠干涉作用的研究的介绍部分。
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