WSSV囊膜蛋白VP28基因在蓝藻中克隆和表达

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WSSV囊膜蛋白VP28基因在蓝藻中克隆和表达

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毕业论文范文题目：WSSV囊膜蛋白VP28基因在蓝藻中克隆和表达，论文范文关键词：WSSV囊膜蛋白VP28基因在蓝藻中克隆和表达
WSSV囊膜蛋白VP28基因在蓝藻中克隆和表达毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：WSSV囊膜蛋白VP28在蓝藻中克隆和表达，目的是在分子水平上探索WSSV的感染机理和防治途径。WSSV是世界养殖对虾病毒性疾病大面积暴发的主要病原。病毒囊膜上的蛋白突起与病毒的感染成功密切相关。WSSV囊膜蛋白VP28，分子量28kD；最近，被初步证明可能在WSSV全身性感染对虾的起始步骤中起关键作用。因为转基因蓝藻中可能对外源病毒蛋白表达后产生拮抗物质，所以本研究选择VP28蛋白在蓝藻中表达,探索WSSV的致病机理、防治和转基因蓝藻中的拮抗现象。本研究通过蔗糖密度梯度离心分离纯化WSSV－中国株，在电镜观察下观察到不同病毒组分的大小、形态及（本文此处忽略..）负染后显示的精细结构；通过SDS-PAGE鉴定在囊膜组分、完整病毒粒子组分中的VP28蛋白。制备兔抗WSSV的多克隆抗体，用ELISA法测定抗血清的效价最高达1：10000,应用该抗血清对WSSV悬液进行检测，结果表明抗血清对VP28蛋白有很好的识别能力。设计一对特异性PCR扩增引物。PCR法从WSSV－中国株基因组DNA中扩增得到vp28基因片段640bp，并在起始密码子ATG前，填加了适合于蓝藻表达系统高效表达的SD序列。并将vp28基因插到pUC－19质粒的EcoRⅠ和BamHⅠ的位点之间，构建了克隆载体pUC-VP28,并对vp28基因测序。测序结果表明，vp28基因615b（此处忽略..）p，编码204氨基酸。通过BLAST比较发现，VP28核酸和氨基酸序列与数据库中已有的VP28序列同源性为100％。进一步将vp28基因正向连接到蓝藻穿梭表达载体pRL－489上的启动子PpsbA下游，酶切鉴定连接正确。PpsbA是蓝藻中很强的启动子，使外源基因有较高的转录水平；在vp28基因ATG前填加适合蓝藻表达的SD序列，使得外源基因有更高的翻译水平。该重组穿梭表达载体命名为pRL－VP28，用于转化丝状体蓝藻和单细胞蓝藻。三亲接合转移法导入vp28基因的宿主，除了选择基因工程中常用的丝状体鱼腥藻Anabaenasp.PCC7120、更侧重选用培养在100％海水中海洋单细胞藻聚（文章此处忽略..）球藻Synechococcussp.PCC7002和50％海水中驯化的鱼腥藻Anabaenasp.PCC7120。通过比较BG－11和50％海水中的鱼腥藻7120转化的现象，发现两者在WP=7形态结构、生长周期和新霉素的敏感性有着较大的差异，但在转化效率上没有明显的差异。通过PCR扩增在DNA水平上验证vp28基因在两种鱼腥藻Anabaenasp.PCC7120中均以质粒形式存在，在聚球藻Synechococcussp.PCC7002中以整合形式存在于染色体DNA上。用制备的抗WSSV的抗血清，通过WesternBlotting在蛋白水平上证明vp28基因在两种鱼腥藻Anabaenasp.（文章此处忽略..）PCC7120中均得到了表达，分子量为28kD。除了VP28的基因序列已有报道外，上述研究结果至今尚未见国内外有报道。本论文的研究目的是通过基因工程获得WSSV囊膜蛋白VP28的转基因蓝藻，期望有助于揭示WSSV感染对虾的分子机理，确定VP28的功能。同时，为探索病毒基因导入后蓝藻可能产生的拮抗物质和蓝藻基因工程制备疫苗防治病毒病打下基础。

以上为本篇毕业论文范文WSSV囊膜蛋白VP28基因在蓝藻中克隆和表达的介绍部分。

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