副猪嗜血杆菌神经氨酸酶的理化特性及其免疫原性研究

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副猪嗜血杆菌神经氨酸酶的理化特性及其免疫原性研究

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毕业论文范文题目：副猪嗜血杆菌神经氨酸酶的理化特性及其免疫原性研究，论文范文关键词：副猪嗜血杆菌神经氨酸酶的理化特性及其免疫原性研究
副猪嗜血杆菌神经氨酸酶的理化特性及其免疫原性研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,Hps)引起猪的一种全身性疾病,以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征。该病目前对猪场的危害较大。神经氨酸酶是副猪嗜血杆菌一种潜在的重要毒力因子,本试验对Hps神经氨酸酶的理化特性和免疫原性进行了研究,研究内容如下：1、Hps神经氨酸酶的理化特性研究Hps神经氨酸酶的提取与纯化：分别对血清5型(Hps-5)和血清12型(Hps-12)菌株进行培养,收集菌体,经超声波破碎法提取神经氨酸酶粗酶,再对粗酶用硫（文章此处忽略..）酸铵盐析和QSepharoseFF阴离子交换层析纯化,再经SDS-PAGE电泳和神经氨酸酶检测试剂盒进行鉴定。神经氨酸酶提纯物经SDS-PAGE电泳结果表明,Hps-5和Hps-12提取物均只有一条蛋白电泳带,其分子量约为100kD,提纯的Hps神经氨酸酶通过酶活性检测,Hps-5和Hps-12酶活性分别为375.9unit/mg、377.9unit/mg。结果表明,从Hps5和Hps-12菌株中提取到纯度高、活性好的Hps神经氨酸酶。Hps神经氨酸酶的理化特性：用检测试剂盒对不同pH值、温度（此处忽略..）和金属离子条件下的神经氨酸酶活性进行检测。结果表明：Hps-5和Hps-12血清型的神经氨酸酶理化特性相似,pH值为8.0和温度为30℃,是酶的最佳条件,以0.05mol/L的Fe2+、Cu2+和SDS对酶的抑制作用最强,神经氨酸酶活性基本消失,0.05mol/L浓度的Ca2+、Mg2+和EDTA对酶的活性影响也较大,表现出较强的酶活抑制性。2、副猪嗜血杆菌神经氨酸酶对小鼠免疫原性的研究两种纯化的Hps-5和Hps-12神经氨酸酶分别进行WesternBlotting,结果显示两种神经氨酸酶均能（文章此处忽略..）与Hps的阳性血清出现较强的反应。分别用灭活的Hps-5,Hps-12全菌及其神经氨酸酶(NA-5,NA-12)与弗氏佐剂按1：1体积充分乳化,对小鼠进行免疫,共三次。分别在首免后0d、14d、28d、42d采血,用间接ELISA方法测定血清的抗体,结果首免后14d可检测到抗体,28d的OD4so吸光值可达1.2-2.0之间,42d的OD450吸光值仍可达1.4-1.9。通过MTT法检测神经氨酸酶对小鼠脾淋巴细胞增殖能力,其Hps-5和Hps-12的神经氨酸酶的转化率均为15%-22%。在最后一次免疫两周后,分别用同型菌株和异型菌株对其攻毒（此处忽略..）,NA-12免疫组对Hps-5菌株和Hps-12菌株的保护率均为66.7%,NA-5免疫组对Hps-5菌株的保护率为50%,对Hps-12菌株的保护率为66.7%。结果表明神经氨酸酶是Hps的主要免疫保护性抗原之一,为进一步研究Hps亚单位疫苗提供理论依据。

以上为本篇毕业论文范文副猪嗜血杆菌神经氨酸酶的理化特性及其免疫原性研究的介绍部分。

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