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斑嘴鸭源新城疫病毒的分离鉴定及分子生物学特性的研究

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毕业论文范文题目:斑嘴鸭源新城疫病毒的分离鉴定及分子生物学特性的研究,论文范文关键词:斑嘴鸭源新城疫病毒的分离鉴定及分子生物学特性的研究
斑嘴鸭源新城疫病毒的分离鉴定及分子生物学特性的研究毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:新城疫(Newcastledisease,ND)仍然是威胁养禽业的一种主要疾病,给养禽业造成巨大的损失,国际兽医局(OfficeInternationdesEpizooties,OIE)将其与高致病性禽流感一起列为危害养禽业的必须报告的疾病。自1997年以来,华南和华东地区部分省市发生了新城疫病毒(Newcastlediseasevirus,NDV)感染鹅的病例,虽然各地采取了积极的防治措施,但该病仍然逐渐蔓延、流行。有不少学者对此进行了研究,但有关病原的生物学特性及流行病学等方面,仍存在很多疑问。1斑嘴鸭源新城疫病毒的分离纯化与毒力鉴定本研究从盐城国家自然保护区的斑嘴鸭群中,采集肛拭子,经实验室常规处理接种(本文此处忽略..)鸡胚,收集24h后致死鸡胚的尿囊液,采用病毒蚀斑纯化技术纯化病毒,结果分离获得三株病毒;通过透射电镜观察,新分离病毒呈典型的新城疫病毒粒子的形态结构;以抗NDV鸡多抗血清为一抗作间接免疫荧光试验(IFA),结果观察到特异性的亮绿色荧光,证明该病毒为新城疫病毒,分别命名为7XJS061、8XJS062、L2JS063。用这些病毒接种鸡胚,结果鸡胚死亡,胚体全身出血。病毒的主要致病指数如鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内接种指数(ICPI)及组织培养半数感染量(TCID_(50))的检测结果表明,3株病毒的MDT分别为52h、48h、46h,ICPI为1.523(L2JS063),TCID50分别为10~(5.625)/0.1ml、10~(7.25)/0.1ml、10~(8.625)/0.1ml。试验结果证明来源于野生斑嘴鸭的3株N(文章此处忽略..)DV为新城疫强毒。22斑嘴鸭源新城疫病毒融合蛋白(Fusionprotein)基因的克隆及序列分析根据Genbank上已发表的NDVF基因序列设计一对扩增F基因的引物,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,并经克隆和测序,结果获得了野鸭源NDV7XJS061、8XJS062、L2JS063F基因约1662bp的片段,序列分析结果表明,3株野鸭源NDVF蛋白的裂解序列为~(112)R/K-R-Q-K/R-R-F~(117),与NDV强毒株的特征一致。对获得的3株野鸭源病毒F基因的序列与Genbank上发表的鹅源、鸡源、鸭源等病毒的F基因的相应序列进行比较,结果7XJS061、8XJS062、L2JS063与鹅源病毒ZJ1株之间的同源性为97.5%-97.6%,与鸭源病毒semi-musco(文章此处忽略..)vyduckFM1株之间的同源性为84.3%-84.4%,与鸡源标准弱毒株LaSota的同源性为84.5%,与鸡源强毒株F48E9株的同源性为97.5-97.6%,与猪源swineSP13株的同源性为84.5%-84.6%,与Ch983的同源性为98.1%-98.2%。本研究表明,斑嘴鸭源NDV可能与同期或稍早期的鸡源NDV流行有密切的关系。3斑嘴鸭源新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因C-末端部分片段的克隆及序列分析根据Genbank上已发表的NDV血凝素-神经氨酸酶基因C-末端基因的部分片段基因序列设计三条扩增HNC-末端基因的引物,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增分离株血凝素-神经氨酸酶基因C-末端基因的部分片段,经克隆测序,获得约340bp的片段,序列分析结果显示,(此处忽略..)3株病毒的终止密码子在同一位置,且与标准强毒株F48E8的终止密码子位置相同,但比标准弱毒株Lasota的HN少18个碱基,说明3株野鸭源病毒为强毒株,而且可能来源于鸡群内同期或稍早期的NDV强毒株。


以上为本篇毕业论文范文斑嘴鸭源新城疫病毒的分离鉴定及分子生物学特性的研究的介绍部分。
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