水蕨中含铁型超氧化物岐化酶Fe-SOD基因的克隆及功能鉴定

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水蕨中含铁型超氧化物岐化酶Fe-SOD基因的克隆及功能鉴定

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毕业论文范文题目：水蕨中含铁型超氧化物岐化酶Fe-SOD基因的克隆及功能鉴定，论文范文关键词：水蕨中含铁型超氧化物岐化酶Fe-SOD基因的克隆及功能鉴定
水蕨中含铁型超氧化物岐化酶Fe-SOD基因的克隆及功能鉴定毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：蕨类动物,因为其独特的演变地位跟状况构造的多样性,在动物界存在非常重要的地位。其中,水蕨被用作研究遗传,生物学,细胞学,分子生物学的模式物种。近年来,蕨类动物越来越受到人们的关注,跟着分子生物学技巧在种子动物中利用始终的完美跟成熟,人们也开端用这方面的方法跟技巧摸索蕨类动物成长发育跟代谢的分子机制。本文恰是在这样的背景下,从分子程度上对水蕨进行研究,利用基因工程技巧,采取RACE方法克隆了水蕨的Fe-SOD基因,转入大肠杆菌中进行表白。并对表白蛋白进行了纯化,鉴定。同时,通过胁迫水蕨配子体在不同环境的成长,检测水蕨中Fe-SOD的功能。本研究通过简并引物,首先从水（此处忽略..）蕨中得到一个458bp的Fe-SOD核心片段。再通过RACE的方法,分辨进行5’RACE跟3’RACE,得到5’跟3’两个亚克隆,分辨获取了382bp的5’端片段跟691bp的3’端片段。最后通过已知的序列设计特异性引物,克隆得到1212bp的Fe-SOD的完全序列,该序列编码266个氨基酸。通过生物信息学分析可能看出,此Fe-SOD的核酸序列与其余动物的序列存在较高的同源性。该酶的氨基酸序列中含3个Fe-SOD的保守序列:FNNA、FGSGW、WEHAYY。同时与其余动物的Fe-SOD氨基酸序列也存在很高的同源性。将该Fe-SOD目标片段与pET32a载体连接后转化入大肠杆菌BL21,之后用1mM的IPTG引诱6h,表（文章此处忽略..）白构成一个大小43KD的蛋白,与预计大小合乎。得到的重组蛋白经过纯化后制备抗体,将该抗体利用于检测水蕨逆境胁迫下的Fe-SOD的表白。水蕨配子体在低温胁迫4℃下持续处理72小时候后,通过Western-blotting检测发明,在8小时到12小时之间,Fe-SOD的表白量达到最高,而此后骤然降落,阐明当动物在酷寒环境下时,Fe-SOD在发挥作用,跟着胁迫时光的延长表白量增大,然而当24小时候后,表白量明显降落,因为此时水蕨配子体的整体开端萎蔫。而72小时候,部分的配子体已经逝世亡或结束成长,所以此时Fe-SOD的表白量也已经非常小了。也就是说,Fe-SOD在必定时光内可能帮助动物抵抗不良（本文此处忽略..）环境,但并不能长时光有效。水蕨配子体在不同的光照胁迫下处理24小时候后,固然这些配子体从外形来看并不明显差别,但通过Western-blotting检测发明,无论配子体处于是低光照还是高光照前提下,Fe-SOD的表白量都有所回升,而在培养箱光照强度下,Fe-SOD的表白量绝对较小,阐明光照过高或者过低对动物体来说都是一种不良的刺激,低光照会导致光照不足,而高光照会造成光克制。在这样的情况下动物体内会过多的产生氧自由基。此时Fe-SOD发挥作用清除动物体内因为受到过强或过低光照而产生的氧自由基,故而表白量增高,以保护细胞免受侵害,帮助动物抵抗不良环境。蕨类动物作为动物界（本文此处忽略..）中重要过渡的类群,是研究进化不可缺乏的重要环节。另外,蕨类动物中还有很多非常重要动物类群,有的是可贵的药用动物,有的是特别的抗逆动物,研究这些蕨类动物的功能基因以及代谢道路对医学,农业,食品,等方面都存在重要价值,对人类的出产跟发展,既有重要意思。.然而目前蕨类动物中还未有成熟的转化体系,给蕨类的分子机制跟功能基因研究带来了必定的艰苦。同时蕨类中已知的序列信息绝对比较少,也是其分子生物学研究进展绝对较慢的起因之一。本研究得带的成果为蕨类的功能基因研究提供了必定的数据跟参考。

以上为本篇毕业论文范文水蕨中含铁型超氧化物岐化酶Fe-SOD基因的克隆及功能鉴定的介绍部分。

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