芋螺毒素及类似物抗吗啡精力依附的作用及机制研究

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芋螺毒素及类似物抗吗啡精力依附的作用及机制研究

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毕业论文范文题目：芋螺毒素及类似物抗吗啡精力依附的作用及机制研究，论文范文关键词：芋螺毒素及类似物抗吗啡精力依附的作用及机制研究
芋螺毒素及类似物抗吗啡精力依附的作用及机制研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：1目标药物成瘾是一个世界范畴内日趋重大的医学跟社会问题，世界各国无一幸免地受到毒品的侵袭。药物成瘾是以失去把持才能、逼迫性持续用药为重要特点的慢性复发性脑疾病。成瘾行动构成过程中有多种学习记忆体系的参加。研究表明，成瘾跟学习记忆过程有很多雷同的神经生物学改变，与学习记忆有关的重要脑区、功能分子跟信号转导体系参加了药物依附的构成跟心理渴求导致的复吸。因此，懂得有成瘾特点化的学习记忆机制对探究成瘾的本质有重要意思。长时程加强(long-termpotentiation，LTP)作为学习跟记忆的模式已经得到公认，并且是陈述性记忆的分子机制。在LTP引诱过程中必须有Ca~(2+)／钙调素依附的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)参加跟活化，CaMKⅡ可能是记忆的分子基本。CaMKⅡ是学习记忆跟药物成瘾过程的独特影响因子，可能作为研究药物成瘾跟学习记忆独特生物学机制的指标。其中CaMKⅡα亚基与空间学习才能密切相干。针对以上机制，咱们的研究集中在目前国际上的一个热点——芋螺毒素上。芋螺毒素(CTX)是一类来源于大陆软体生物芋螺(Conus)的活性多肽。芋螺毒素按其作用靶位可分为ω-、δ-、α-跟conantokins等类型，其中ω-CTXMVⅡA抉择性作用于N型电压门控钙通道(N-VGCCs)，而conantokins抉择性作用于N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体。已有研究表明，钙离子通道跟谷氨酸受体尤其是NMDA受体参加了药物依附的构成。其可能的作用道路是：本研究利用自行开发的视频跟踪-打算机主动分析CPP模型体系，树破吗啡引诱的小鼠CPP构成模型，检测芋螺毒素类似物[Glu~(3，4，7，（略..）10，14)]-conantokinG对吗啡引诱小鼠CPP表白的影响，评估其在干涉吗啡精力依附方面的药效，与本实验室前期工作进行比较，并探讨CaMKⅡ在吗啡成瘾相干脑区所起的作用。2材料跟方法2．1实验动物干净级雄性昆明种小鼠，体重18～20g。独破通风笼具(IVC)豢养，每笼4只，自由摄取食品跟水。2．2药物盐酸吗啡打针液(沈阳第一制药厂)；生理盐水(浙江平湖莎普爱思制药有限公司)；[Glu~(3，4，7，10，14)]-conantokinG(Sigma)。anti-CaMKⅡα抗体(Sigma)、辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔二抗(北京中杉生物有限公司)、MonoclonalAnti-β-Actin(Sigma)、HRP标记的羊抗鼠二抗(北京中杉生物有限公司)。2．3CPP实验安装视频跟踪—打算机主动分析CPP模型体系：4个雷同的长方形PVC材料穿梭盒(30cm×15cm×15cm)组成一个45cm×45cm×15cm的正方形盒子，每个盒子被一个隔板分成两个大小雷同的正方形盒子(15cm×15cm×15cm)，其中一个盒子四处均为白色，底面光滑，做为伴药盒；另一个四处均为黑色，底面镂刻成网格。摄像体系可能完全记录小鼠的活动情况，采集的视频图像用自行开发的MiceTrack软件进行分析。2．4CPP练习程序：包含天然偏爱测试、前提性地位偏爱(CPP)的树破跟表白，具体操作步骤如下：天然偏爱测试：实验开端前三天，穿梭盒旁边采取通道型隔板，将小鼠放置两盒交界处，让其在两盒内自由活动15分钟，摄录活动情况，以便分析其天然偏恋情况。CPP的树破：隔板将穿梭盒分隔成两个独破的盒子，实验组小鼠在d1、d3、d5、d7天给予吗啡(5mg／kg)后放置白盒练习50分钟；d2、d4、d6、d8天给予生理盐水后放置（本文此处忽略..）黑盒练习50分钟。对比组小鼠均给予生理盐水，其它处理同实验组小鼠。CPP的表白：在实验的d9天，将旁边隔板换成通道型，小鼠未作任何处理放置两盒交界处，让其在两盒内自由活动15分钟，摄录其活动情况，用MiceTrack软件分析小鼠在黑盒跟白盒内的停留时光，作为地位偏爱的评估指标。2．5芋螺毒素给药处理芋螺毒素类似物[Glu~(3，4，7，10，14)]-ConantokinG(Glu-ConG)以生理盐水做溶剂。在吗啡引诱CPP表白测试前半小时，小鼠侧脑室分辨给予Glu-ConG30、60、120pmol，给药容量为5μl／只。2．6CaMKⅡα表白量测定步骤：总蛋白提取试剂盒提取总蛋白，BCA法测定蛋白浓度。灌制SDS-PAGE(10％的分别胶跟5％的积层胶)，将配成雷同蛋白浓度并处理好的蛋白样品上样(每孔20μg)，电泳(110V，1.5h)，用湿电转膜法将蛋白转至硝酸纤维膜(Amersham公司)(110V，2h)。取出膜放入含5％脱脂奶粉的TBST液，室温轻摇2h，取出膜，放入anti-CaMKⅡα一抗液(1∶3000稀释)，4℃孵育过夜。TBST液疾速摇洗后(25min)，将膜放入HRP标记的抗兔第二抗体(1∶3000稀释)，室温下孵育2小时，TBST液疾速摇洗后(25min)，置等体积ECLA液跟ECLB液混淆的发光剂底物液中1min，曝光1min后，显影、定影。用TBST疾速洗膜20min，将膜放入anti-Actin一抗(1∶5000)，室温孵育2小时；用TBST疾速洗膜25min，将膜放入anti-mouse第二抗体中，温跟振荡2小时；用TBST疾速洗膜25min；ECLA液跟ECLB液等体积混淆后，将膜在ECL中温浴1min；曝光1min，将胶片显影、定影。2．7实验察看指标及统计分析地位偏爱指标：白盒(伴药盒)停留（文章此处忽略..）时光；活动活性指标：总活动间隔；摸索活动指标：穿梭次数，总核心彷徨间隔，总核心停留时光，白盒核心彷徨间隔，白盒核心停留时光。均用均数±标准误表示。P＜0.05视为有统计学差别。Westernblotting胶片用GS-800扫描入打算机，用Bioradquantityone4．4．0densitomonter图像分析软件打算每张胶片中各条带的灰度，以相应条带的内参Actin的均匀灰度做标准，打算CaMKⅡα各条带与之比较的绝对比值，打算其余各条带与之比较的绝对比值，进行定量分析。3成果3．1吗啡引诱的前提性地位偏爱模型的树破天然偏爱成果显示：小鼠在黑盒停留时光(s)较白盒长(分辨为504.0±25.1跟396.6±25.1，P＜0.05)，对黑盒有所偏爱。5mg／kg吗啡组小鼠在白盒停留时光明显善于对比组(分辨为573.2±53.0跟441.1±39.3，P＜0.05)，提示小鼠已树破对白盒的偏爱。3．2芋螺毒素对吗啡引诱CPP表白的干涉作用吗啡引诱的CPP表白阶段，芋螺毒素类似物Glu-ConG处理组(0、30、60、120pmol)同吗啡对比组比拟，白盒停留时光呈剂量依附性减少，各组活动活性及摸索活动比较无明显性差别。相干性分析后，各组地位偏爱同活动活性及摸索活动无相干性。3．3芋螺毒素类似物Glu-ConG与GST-CTXMVⅡA及ConG拮抗吗啡CPP表白的作用比较等同剂量(0.003mg／kg)的芋螺毒素侧脑室给药，ConG比Glu-ConG干涉小鼠地位偏爱的作用稍强，但两者之间无明显性差别；而GST-CTXMVⅡA的有效剂量约为两者的十倍。3．4CaMKⅡα在芋螺毒素GST-CTXMVⅡA干涉吗啡CPP表白的前额叶皮质(PFC)跟海马(HP)脑区表白量的变更吗啡组跟0.01mg／kgG（本文此处忽略..）ST-CTXMVⅡA干涉组PFC跟HP脑区CaMKⅡα蛋白表白增多，均明显高于生理盐水对比组(P＜0.05)；同吗啡组比拟，0.03、0.1mg／kgGST-CTXMVⅡA干涉组跟盐水组PFC跟HP脑区CaMKⅡα蛋白表白降落(P＜0.05)。4论断4．1改进、完美的视频跟踪—打算机主动分析CPP模型体系能成功分析小鼠地位偏爱指标、活动活性指标及摸索活动指标，成果牢固坚固；4．2[Glu~(3，4，7，10，14)]-ConantokinG能有效干涉吗啡引诱的CPP的表白；4．3[Glu~(3，4，7，10，14)]-ConantokinG在本实验剂量范畴内不引起小鼠活动活性及摸索活动的异样，小鼠地位偏爱与活动活性及摸索活动无相干性；4．4GST-CTXMVⅡA阻断Ca~(2+)通道，降落CaMKⅡα的表白程度，为证明CaMKⅡ参加药物成瘾提供了更多实验根据。

以上为本篇毕业论文范文芋螺毒素及类似物抗吗啡精力依附的作用及机制研究的介绍部分。

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