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小鼠和山羊胚胎干细胞的分离与培养

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毕业论文范文题目：小鼠和山羊胚胎干细胞的分离与培养，论文范文关键词：小鼠和山羊胚胎干细胞的分离与培养
小鼠和山羊胚胎干细胞的分离与培养毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：近年来,胚胎干细胞(Embryonicstemcells,ESCs)以其所具有的全能性、多能性、可操作性及可塑性等诸多优点,成为医学和生命科学领域研究的热点问题之一。小鼠胚胎干细胞(mESCs)已在发育生物学、人类疾病和药物开发等研究领域中得到广泛应用,小鼠ESCs建系技术的丰富完善为建立人类和动物ESCs系提供了参照标准和理论依据。本实验以12.5~13.5dICR小鼠胎儿制备小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层,比较了甘油和DMSO分别作为冷冻保护剂对MEF冷冻效果的影响;以3.5dICR小鼠胚胎为实验材料,探讨了胚胎不同发育阶段、血清、生长因子及传代方法对ICR小鼠ES细胞分离培养的影响。实验结果如下:1.在小鼠胚胎成纤维细胞冷冻时,采（此处忽略..）用含10%甘油的DMEM溶液作为常规冷冻保护液效果好于含10%DMSO的DMEM溶液,细胞活力分别为0.787,0.728。2.3.5d的ICR小鼠胚胎大多为囊胚或桑椹胚,接种到MEF饲养层后,以含15%FBS的ES细胞培养液培养,囊胚的贴壁率与ICM增殖率(75.4%,72.8%)均显著高于桑椹胚(57.9%,52.6%)(P0.05),且桑椹胚的贴壁及增殖速度都比囊胚缓慢,因此以囊胚进行ICM的分离培养效果更佳。3.以ICR小鼠囊胚为材料,采用含15%FBS的ES细胞培养液的囊胚贴壁率及ICM增殖率(79.3%,69%)均比含15%KSR、5%FBS+10%KSR的细胞培养液高(42.9%,28.6%;75%,54.2%),即培养液中添加15%FBS更有利于囊胚贴壁与ICM增殖,添加5%FBS+10%KSR更能满足小鼠ES细胞在传代培养过程中的生长需要,小鼠ES集落最高传至6代。4.在对培（此处忽略..）养液中添加的因子进行比较时,与无因子的对照组相比,培养液中添加因子对囊胚贴壁、ICM增殖及传代均起到积极作用。添加10ng/mLLIF+10ng/mLSCF的效果比单独添加一种因子的效果好,小鼠ES细胞最高传至6代,高于单独添加一种因子的传代数(4代,2代)。5.用含15%FBS的ES细胞培养液分离获得的小鼠ICM分别采用3种传代方法进行传代,传代时采用5%FBS+10%KSR的ESCs培养液。采用差异贴壁法传代效果最佳,最高传至8代,酶消化法传至4代,机械加酶消化法传至6代。6.实验获得了具有典型ES集落形态的ICR小鼠ES细胞,经AKP染色呈阳性。7.本实验对ICR小鼠ES细胞进行悬浮培养获得了类胚体,在体外培养过程中小鼠ES细胞自发分化为成纤维样细胞、（略..）上皮样细胞、脂肪样细胞及神经样细胞等,并出现空泡化。目前,关于人及小鼠ESCs建系的研究已有详细的报道,但家畜ESCs的研究依然处于初级阶段,很少有关于家畜ESCs建系的报道。山羊胚胎干细胞(ESCs)和胚胎生殖细胞(EGCs)是生产转基因动物、克隆动物,制备乳腺生物反应器等的理想候选细胞,然而至今仍没有成功建系的报道。本实验以30~50d的山羊胎儿及6~8d的山羊囊胚为实验材料,比较了饲养层及生长因子对分离培养山羊ES细胞的影响。实验结果如下:1.实验以机械法分离获得的山羊ICM为材料,对比了MEF、GEF两种饲养层及两种含不同因子的培养液对山羊ES细胞的影响,结果表明采用MEF饲养层ICM增殖率优于GEF饲养层;与对照组相比,培（本文此处忽略..）养液中添加LIF及SCF或胰岛素对山羊ICM的贴壁、增殖及传代都有积极影响;以MEF为饲养层,培养液中同时添加LIF和SCF时,培养山羊ES细胞的效果最佳,传至3代。2.实验获得了具有典型ES集落形态的山羊ES细胞,经AKP染色呈阳性。3.实验过程中,山羊ES细胞自分化为成纤维样细胞、上皮样细胞、脂肪样细胞及神经样细胞等。

以上为本篇毕业论文范文小鼠和山羊胚胎干细胞的分离与培养的介绍部分。

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