壳聚糖—藻酸盐复合凝胶作为髓核组织工程支架的体外实验研究

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壳聚糖—藻酸盐复合凝胶作为髓核组织工程支架的体外实验研究

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毕业论文范文题目：壳聚糖—藻酸盐复合凝胶作为髓核组织工程支架的体外实验研究，论文范文关键词：壳聚糖—藻酸盐复合凝胶作为髓核组织工程支架的体外实验研究
壳聚糖—藻酸盐复合凝胶作为髓核组织工程支架的体外实验研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景:腰痛是现代化社会中一种常见的症状,是导致劳动力丧失的主要原因之一,腰椎间盘突出症等椎间盘退行性疾病(DDD)是引起腰痛最常见的原因。伴随人体的老化,椎间盘也相应发生退行性改变,外科治疗方法如椎间盘切除或椎间融合术等手段是以牺牲椎间盘节段功能为代价的,而且会导致相邻节段更快的退变。如何延缓和降低椎间盘退变的速率,以及研究符合椎间盘包括髓核结构与功能的移植物,对退变椎间盘进行功能重建,已成为椎间盘退行性疾病比较理想的解决方案。组织工程是一个新兴的学科,通过将细胞与支架材料复合,加以生长因子。理想的结果可以修复或替换无功能或退变的组织器官.组织工程学的迅速发展和关键技术的突破,促进了髓核组织工程的发展。种子细胞和支架材料是其关键的问题。干细胞作为组织工程的种子细胞有其不可替代的优势,胚胎干细（文章此处忽略..）胞由于医学伦理上的争议受到限制,而间质干细胞(MSCs)可从成人获取,应用广泛,除了骨髓外,脂肪组织同样可分离出干细胞。髓核细胞的起源目前还不肯定,但大多数的研究者认为其与软骨细胞非常类似,称其为软骨样细胞。脂肪干细胞(ADSCs)具有多向分化潜能,可以诱导分化为软骨样细胞,被认为是理想的种子细胞;髓核组织的特殊生理结构和力学性能要求髓核组织工程支架应该同时满足以下条件:①生物相容性良好;②降解速率适当;③三维立体多孔结构;④具有一定的机械强度;⑤良好的细胞界面;⑥加工性能优异等。本课题选用ADSCs作为种子细胞,制备壳聚糖/藻酸盐凝胶支架材料,研究壳聚糖/藻酸盐凝胶材料对ADSCs增殖和分化的影响;并对其作为髓核组织工程的支架材料的重要指标如孔隙率、孔隙大小、以及细胞在该支架材料上的增殖能力进行了（本文此处忽略..）探讨。目的:1.进一步明确兔ADSCs在体外培养条件下的生物学特性及其成软骨能力,探索更为有效的ADSCs体外培养方法。2.制备壳聚糖-藻酸盐复合凝胶材料,检测该三维支架材料的孔隙情况和初步探讨该复合材料的细胞相容性,研究壳聚糖-藻酸盐复合凝胶对兔ADSCs增殖和分化影响,为壳聚糖-藻酸盐复合凝胶作为髓核组织工程中ADSCs的载体提供实验依据。方法:1.提取兔原代ADSCs,用DMEM完全培养基和成软骨诱导条件培养基(CM)体外培养,进行干细胞检测,倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态;活细胞计数绘制细胞生长曲线;计算细胞贴壁率,AB和VanGieson染色以判断细胞是否向成软骨样细胞分化。2.制备壳聚糖-藻酸盐凝胶支架,扫描电镜观察材料结构,计算孔隙大小,孔隙率。3.将兔ADSCs接种于壳聚糖-藻酸盐支（此处忽略..）架上,用成软骨诱导培养液(CM)培养,同时设立对照组,通过扫描电镜、阿利新蓝、番红O染色进行组织形态学观察;在培养7d、14d、21d时取标本行组织学检测,测定培养物中糖胺聚糖(GAG)含量及Ⅱ型胶原的含量量。结果:1.体外培养的兔原代ADSCs贴壁生长,呈梭形和多角形,传代后细胞分裂增殖活跃;诱导后的ADSCs的形状趋向于类圆形,使用条件培养基向成软骨诱导后的兔ADSCs倍增时间由34.90h延长至43.73h,即增殖速度减慢;VanGieson染色及AB染色显示有II型胶原成分和蛋白聚糖成分。2.壳聚糖-藻酸盐支架具有网状孔隙结构,孔径大小在50μm-200μm之间,并有较高的孔隙率,为80.57%。3.倒置显微镜及扫描电镜观察细胞在支架中生长良好。体外培养7d、14d、21d时,诱导组培养液中细胞外基质sGAG含量(ug/ml)分别为:18.69±3.56,53.92±3.22,73.97±7.（文章此处忽略..）31;DMEM组培养液中细胞外基质GAG含量(ug/ml)分别为:21.31±2.1,36.63±4.14,38.02±9.34,两组间比较有统计学差异(P0.05);II型胶原含量两组间比较有统计学意义(P0.05)。阿里新蓝染色和番红O染色阳性。结论:1.脂肪干细胞提取方便,成软骨诱导的脂肪干细胞细胞表现出软骨样细胞的生物学特性,可以作为髓核细胞组织工程的种子细胞。2.壳聚糖-藻酸盐凝胶三维支架具有较理想的髓核组织工程支架的特性,适合细胞生长。3.rADSCs在壳聚糖-藻酸盐三维支架上培养生长良好,在特定的诱导培养液诱导下可以向软骨样细胞分化。

以上为本篇毕业论文范文壳聚糖—藻酸盐复合凝胶作为髓核组织工程支架的体外实验研究的介绍部分。

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