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NS398对人卵巢癌细胞系成长克制造用的研究

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毕业论文范文题目:NS398对人卵巢癌细胞系成长克制造用的研究,论文范文关键词:NS398对人卵巢癌细胞系成长克制造用的研究
NS398对人卵巢癌细胞系成长克制造用的研究毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:目标卵巢恶性肿瘤是女性生殖器官常见的恶性肿瘤,其发病率占女性生殖器官恶性肿瘤的第三位,仅次于子宫颈癌跟子宫内膜癌。因为受卵巢解剖地位的影响,卵巢癌早期诊断艰苦,晚期医治后果差。只管卵巢癌细胞减灭术的程度始终进步,新的化疗药物始终被开发利用,卵巢癌总的5年生存率仍然很低,彷徨在25%-30%。为此,树破新的、有效的卵巢癌防治办法势在必行。非类固醇类抗炎药物(nonsteroidanti-inflammatorydrugsNSAIDs)是FelixHoffman于1893年首先发明的医治关节炎的药物,很长一段时光,在临床上被用于抗炎镇痛,只是在最近才发明它们能被用来防治结肠癌的产生。研究表明,NSAIDs对肿瘤细胞的增殖存在克制造用,并能促进肿瘤细胞的凋亡。因此认为NSAIDs在肿瘤的化学防备方面极具发展潜力。Vane在1971年提出NSAIDs的抗炎机制在于克制了环氧合酶(COX),它是催化花生四烯酸(AA)转化成前列腺素类物质(PGs)的关键酶,存在两种同分异构体的情势,即COX(此处忽略..)-1跟COX-2,它们分辨由位于两条不同染色体上的各自独破的基因所编码。根据NSAIDs对COX异构体COX-1跟COX-2克制造用的不同,可将其分为三类:COX-1抉择性克制剂,COX-2抉择性克制剂,COX非抉择性克制剂。本研究采取的NS398{N-[2-(cyclohexyloxy)-4-nitrophenyl]-methanesulfonamide}是一种磺胺类药剂的衍生物,属于NSAIDs中的COX-2抉择性克制剂,特异性地克制COX-2。近年来的研究显示,COX-2在很多种人类肿瘤,如结肠癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌、胃癌等恶性肿瘤中表白上调,而COX-1表白保持不变,咱们也首次在卵巢上皮性浆液性癌中检测到COX-2的表白,其表白率高达81.9%。为探讨NS398是否存在抗人卵巢癌细胞的活性,咱们采取体外实验的方法,察看NS398对人卵巢癌细胞系的影响,为NS398防治卵巢癌提供实验根据。材料与方法材料:人卵巢上皮性浆液性癌细胞系CAOV3,OVCAR3由中国医科大学细胞生物实验室提供。两种(略..)细胞分辨贴壁成长在含10助热灭活胎牛血清(FetalBovineSerumFBS),青霉素100U/Inl,链霉素100pg/all的RPMll640培养基中,于37tj%CO卜饱跟湿度的恒温密闭培养箱内传代培养,0.25%胰蛋白酶(TyPsin)消化。试剂:NS398为美国Cayman公司产品;COX-2单抗/P免疫组织化学试剂盒为美国SantaCruz公司产品;COX-ZmRNA及内对比引物由北京奥科生物有限义务公司合成;逆转录试剂盒由大连宝生物公司(TaKaR公司产品)提供;四甲基偶氮哩蓝(MTf人苔盼蓝为美国Sipoa公司产品;末端脱氧核着转移酶门dT)凋亡原位染色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司;RT-PCR。DNA叫adder惯例试剂由中国医科大学第二临床学院卫生部先天畸形实验室提供。方法:1.免疫组化实验2.RT—PCR实验3.细胞成长克制实验3.1细胞计数法3.2MrIT法4.细胞状况学实验·2·4.1倒置相差显微镜(InvertedPhaseCon恤stMicroscope)4.(此处忽略..)2电镜(Elec肋nmicroscope)5.DNA梯形电泳:6.末端脱氧核着转移酶介导的dUTP缺口末端标记实验(Terminddeoxyxynucleotldglransferase-mediateddUTPnickendlabelingTUNEL)统计学分析:利用SPSSforwindows100软件包分析数据。NS398对人卵巢癌细胞系的作用成果以XiS表示,明显性测验采取单因素方差分析Dunnettt测验。成果1.人卵巢癌细胞系CAOV3跟OVCAR3的COX-2蛋白及COX-ZmRNA表白均为阳性。2.细胞计数法及MTh法实验成果均显示,NS398组活细胞数明显少于未加药组门照组厂并随药物浓度的增加活细胞数逐步减少,克制率增加。同时,每个药物浓度组随药物作用时光的延长,活细胞数进一步减少,克制率进一步增加。本研究中以药物作用72小时,其残余的活细胞数与对比组比拟明显减少,存在统计学意思瞩<0.05厂提示跟着药物浓度的增加,以及作用时光的延长,细胞增殖的克制越发明显。3.细(略..)胞状况学成果显示,相差显微镜下,细胞密度明显降落,细胞体积缩小,细胞缝隙明显增宽,细胞内可见明显的“空泡”状构造;扫描电镜下,细胞体积明显缩小,缝隙明显增宽,其名义的微绒毛骤然减少甚至消散;透射电镜下,细胞核膜完全,染色质凑集成块,边集,胞浆内可见完全的细胞器,细胞膜完全,可见“膜发泡”及“凋亡J体”口4.DNA梯形电泳显示,NS398(100pM)作用72*时的CA-·3·OV3细胞跟OVCAR3细胞呈现特点性的梯形谱带。5.TUNEL实验显示,经NS398(100pM)处理72J时的CA-OV3细胞,大部分细胞的细胞核内呈现棕褐色颗粒,提示为凋亡细胞。探讨风行病学、临床、动物及实验室的研究均证明NSAIDS存在防备结直


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