构建RNA结合蛋白表达文库并研究其在信号转导中的调控机制

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毕业论文范文题目： 构建RNA结合蛋白表达文库并研究其在信号转导中的调控机制，论文范文关键词： 构建RNA结合蛋白表达文库并研究其在信号转导中的调控机制
构建RNA结合蛋白表达文库并研究其在信号转导中的调控机制毕业论文范文介绍开始：
　　构建RNA结合蛋白表达文库并研究其在信号转导中的调控机制（硕士学位论文），共64页。
　　【摘要】转化生长因子-β (Transforming Growth Factor-β或者TGF-β)作为一种重要的细胞因子在细胞的生长、增殖、分化中发挥着非常重要的调控作用。因此,TGF-β信号通路的调控异常与人类多种疾病密切相关如癌症等。在TGF-β信号传递过程中Smads蛋白发挥了重要的作用。Smads家族蛋白根据其结构和功能可以分为三大类,分别是受体激活的R-Smads(如Smad2/3),通用转导的Co-Smad,以及抑制型的I-Smads,在经典的TGF-β信号通路中,配体与细胞表面的受体结合,从而引起R-Smads的磷酸化。磷酸化的R-Smads与Co-Smad结合形成三聚体进入细胞核,结合到特定的DNA序列从而调控下游基因的表达。在TGF-β信号通路中,转录水平的研究已经比较清楚,但是转录后水平的调控机制还不是非常清晰。基因在转录后,需要经过剪接加工成为成熟的mRNA,最后翻译成为蛋白质。经典的转录后剪接加工调控主要是通过RNA结合蛋白识别mRNA上的增强或抑制单元来实现的。在TGF-β信号通路中,RNA结合蛋白如何参与其转录后调控的机制还不清晰。本研究拟以构建RNA结合蛋白文库为载体,结合细胞水平和分子水平的实验,研究RNA结合蛋白在TGF-β信号通路中的调控作用。根据RNA结合蛋白数据库中的信息,在人类细胞中有235个蛋白含有一个或多个RNA结合单元(RNA Recognition Motif或者RRM)。对照cDNA文库(Human ORFeome5.1),我们获得了112个RNA结合蛋白的cDNA。通过Gateway系统,我们将文库中的cDNA成功构建到慢病毒载体上,并在293T细胞中进行了表达检测,其中86个可以正确表达蛋白。然后我们利用TGF-β荧光素酶报告系统SBE-luc在HaCaT细胞中进行初步筛选并发现调控TGF-β多个重要蛋白。我们围绕其中一个蛋白RBP75进行了深入研究,实验证实RBP75可以促进TGF-β信号通路,从而促进细胞发生上皮细胞-间充质细胞转化(Epithelial Mesenchymal Transition或EMT)。进一步研究证实,RBP75的RNA结合单元能够直接与蛋白Smad2/3相互作用,从而促进TGF-β信号通路的转导。这为研究RNA结合蛋白在癌症细胞转移中的调控机制提供了新的参考依据。
　　【关键词】 RNA结合蛋白； TGF-β信号通路； EMT；
　　
　　目次
　　致谢 I
　　申文摘要 III
　　Abstract V
　　目次
　　1 51 言 1
　　l.lTGF-p信号通路 1
　　1.2 TGF-P诱导 EMT 3
　　1.3RNA结合蛋白 5
　　1.4 TGF-P信号通路中的RNA结合蛋白 7
　　2实验材料与方法 9
　　2.1实验材料 9
　　2.2实验方法 15
　　3实验结果 24
　　3.1 RNA结合蛋白文库的构建和筛选 24
　　3.2过量表达RBP75促进TGF-p信号通路 30
　　3.3敲减RBP75抑制TGF-p信号通路 35
　　3.4 RBP75的RRM结构域直接与Smads的相S作用 38
　　3.5 RBP75的RRM结构域促进TGF-p信号通路 43
　　4讨论 45
　　参考文献 48
　　作者简介和科研成果 54

以上为本篇毕业论文范文 构建RNA结合蛋白表达文库并研究其在信号转导中的调控机制的介绍部分。

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