猪粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子基因在毕赤酵母中的表达研究

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毕业论文范文题目： 猪粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子基因在毕赤酵母中的表达研究，论文范文关键词： 猪粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子基因在毕赤酵母中的表达研究
猪粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子基因在毕赤酵母中的表达研究毕业论文范文介绍开始：
　　硕士学位论文猪粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子基因在毕赤酵母中的表达研究，排版较乱，公供参考。
　　摘要
　　粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(GM一CSF)是一种具有多种生物学活性的细胞因子。GM一CSF对机体炎症，肿瘤以及其他一些疾病都有较好的抑制或辅助治疗作用，同时还具有明显的免疫增强作用，具有很好的应用前景。研究具有生物学活性的GM一CSF蛋白的体外表达具有重要意义。本研究开展了猪GM一CSF(pGM一CSF)基因毕赤酵母体外表达研究。
　　1、毕赤酵母表达载体pHcgK一pGM的构建研究针对含有pGM一CSF全部编码区基因的载体19T-GM设计一对引物，扩增出pGM一CsF去信号肤的成熟编码区基因，大小为384bp;pGM一CsF基因插入 pMD19一 T51娜leVeetor，成功构建pMD19一T-pGM克隆质粒;pMD19一T-pGM经EcoRI和Notl双酶切后，回收pGM一CSF基因，插入经相同双酶切处理的载体ppICgK中，构建毕赤酵母表达载体ppICgK一poM，对pplegK一poM进行PeR鉴定和双酶切鉴定，结果表明成功构建pPICgK一pGM表达载体。
　　2、GsllszpPlegK一pGM重组菌的筛选将pPIcgK一pGM经saol线性化再乙醇沉淀回收，电转化毕赤酵母宿主菌
　　GSI巧感受态细胞，接种于YPD平板上，在30℃培养3d，培养基长出乳白色菌落，表明pPIcgK一pGM重组子转化成功;重组子进行G418/YpD浓度梯度筛选，结果在 4mg/mL的G418/YPD培养基上获得高拷贝重组子;将高拷贝重组子进行表型鉴定筛选，成功筛选到Mut+型高拷贝重组子;将Mut’型高拷贝重组子进行PCR扩增，扩增出预期的384bP片段，表明重组子筛选正确，并将此高拷贝重组菌命名为 GS115币PICgK一pGM。
　　3、GsllszpPxegKpeM重组菌在毕赤酵母中表达将GS115/PpICgK一pGM于BMoY培养基中激活培养至OD600达2.0一2.5时收集菌体，BMMY培养基调至 OD60O=1.0，于30℃，300r/m的空气培养箱进行培养表达，同时每24h添加甲醇一次，使其终浓度为1%(v/v)。将表达产物进行间接ELISA和SDS一PAGE检测，结果表明pGM一CSF获得表达，表达蛋白的分子量约为18kD，且表达最佳时间为4d。将表达蛋白进行westem一bloting分析，结果表达蛋白能与pGM一csF阳性血清特异性结合，表明产物具有反应原性。将表达的pGM一csF蛋白过滤除菌后进行TF一1细胞增殖试验，该蛋白具有促进TF一1细胞增殖的能力，且活性高达 (0.88一1.05)xl护Iu/陀，表明产物具有较高生物学活性。
　　关键词:猪粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子;毕赤酵母;酵母表达;

以上为本篇毕业论文范文 猪粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子基因在毕赤酵母中的表达研究的介绍部分。

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