Kupffer细胞中GITRL通过抑制PDL-1调控炎症反应的研究

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Kupffer细胞中GITRL通过抑制PDL-1调控炎症反应的研究

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毕业论文范文题目：Kupffer细胞中GITRL通过抑制PDL-1调控炎症反应的研究，论文范文关键词：Kupffer细胞中GITRL通过抑制PDL-1调控炎症反应的研究
Kupffer细胞中GITRL通过抑制PDL-1调控炎症反应的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的：通过分别转染GITRLsiRNA和pEGFP-N1-GITRL重组质粒进入Kupffer细胞（KCs），干扰KCs中GITRL的基础表达，并与T细胞体外共培养，在LPS刺激下观察KCs中PDL1表达情况，对T细胞的活度影响分析，初步探讨GITRL在KCs中通过PDL~(-1)调控炎症反应机制。方法：1、采用不连续密度梯度离心、选择性贴壁法分离小鼠KCs与尼龙毛柱过滤纯化脾淋巴细胞提取T细胞。2、随机将KCs分为四组转染，将GITRLsiRNA和pEGFP-N1-GITRL重组质粒，及其分别对应的controlsiRNA和空载质粒pEGFP-N1-control转入KCs中。转染24小时后对各组（siRNA：异硫氰酸荧光素标记；重组质粒:pEGFP载体为自带绿色荧光载体)通过荧光显微镜鉴定转染（文章此处忽略..）效果转染效率初步鉴定;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质免疫印迹（Westernbolt）技术进一步对转染各组细胞从基因和蛋白表达水平鉴定。转染后各组细胞和正常KCs细胞分别与T细胞体外共培养（1:10）。3、将共培养细胞分为6组：Control组，未转染处理过的KCs与T细胞共培养体系只加培养基；LPS组，未转染处理过的KCs与T细胞同培养体系加入LPS(1ug／m1)；GITRLsiRNA组,ControlsiRNA组,pEGFP-N1-GITRL组，pEGFP-N1control组，对应分别转染后的KCs与T细胞共培养,处理后同LPS组。24小时后，细胞免疫荧光法,Westernbolt检测KCs的GITRL、PDL1表达,MTT法和Annexin-V/FITC流式法分析T（此处忽略..）细胞活性，ELISA检测上清液肿瘤坏死因子TNFα分泌水平，激光共聚焦观察KCsP65浆核分布情况。结果：1、吞墨实验和F4／80免疫荧光染色鉴定KCs细胞活率和纯度分别为94％和95％，CD3/CD4双抗染色后流式分析T细胞纯度为73.8%。2、转染siRNA和GITRL重组质粒24h后荧光显微镜下观察并鉴定KCs中GITRLsiRNA和pEGFP-N1-GITRL转染效果分别达90％和85%，RT-PCR和Westernbolt检测显示基因沉默组（RT-PCR:0.23±0.13;WB:0.05±0.01）与过表达组（RT-PCR:2.19±0.16;WB:0.86±0.036）均与对照组有显著性差异（P0.05）。3、在LPS刺激24小时后，LPS组,LPS+ControlsiRNA组及pEGFP-N1control组共培养体系中KCs上GITRL（IF:0.26×10~(-1)±0.63×10-3;WB:（略..）1.44±0.5）,T细胞活性(0.78±0.02)和上清液肿瘤坏死因子TNFα(603.50±5.96)分泌表达明显上调（P0.05），PDL1(IF:0.15×10~(-1)±0.10×10~(~(-2));WB:1.44±0.04)显著下调（P0.05）;pEGFP-N1-GITRL组则出现了GITRL(IF:0.24×10~(-1)±0.29×10~(~(-2));WB1.77±0.05),T细胞活性(0.99±0.00)和上清液肿瘤坏死因子TNFα(908.83±2.64)分泌更加显著的上调，而PDL1(IF：0.817×10~(~(-2))±0.75×10-3;WB:1.04±0.07)的表达也进一步的降低。GITRLsiRNA组在被LPS刺激后GITRL(IF:0.11×10~(-1)±0.11×10~(~(-2));WB:1.11±0.04),T细胞增值(0.50±0.04)和分泌的肿瘤坏死因子TNFα(252.83±4.49)的表达明显被下降（P0.05），对PDL1(IF:0.29×10~(-1)±0.81×10-3;WB:1.84±0.04)被抑制的程度也明显减弱（0.05）。结论:KCs上的GITRL上调后可通过抑制PD-L1，激活T细胞活性，（此处忽略..）促进炎症反应的发展，干扰KCs上GITRL表达可恢复免疫平衡，抑制炎症反应程度。

以上为本篇毕业论文范文Kupffer细胞中GITRL通过抑制PDL-1调控炎症反应的研究的介绍部分。

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