雷公藤内酯醇对耐顺铂人卵巢癌细胞体外活性影响及机制的探讨

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雷公藤内酯醇对耐顺铂人卵巢癌细胞体外活性影响及机制的探讨

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毕业论文范文题目：雷公藤内酯醇对耐顺铂人卵巢癌细胞体外活性影响及机制的探讨，论文范文关键词：雷公藤内酯醇对耐顺铂人卵巢癌细胞体外活性影响及机制的探讨
雷公藤内酯醇对耐顺铂人卵巢癌细胞体外活性影响及机制的探讨毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目标：进一步研究雷公藤内酯醇(TP)对耐顺铂人卵巢癌细胞株(COC1/DDP)的体外活性的影响,初步探讨TP对COC1/DDP体外活性影响的机制及COC1/DDP细胞株的耐药机制,为TP成为医治晚期或耐顺铂卵巢癌的药物提供实验根据。方法：1.COC1/DDP细胞传代培养：COC1/DDP细胞用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养,将细胞密度调剂至5×105/ml,置培养瓶中,在37℃、5%CO2、饱跟湿度前提下于恒温培养箱内培养。待细胞至对数成长期,吹打制成单细胞悬液,1000r/min,离心10min,弃上清液,调换培养基,按每瓶以5×10-5/ml密度补充液体容量至7ml接种到培养瓶内。2、MTT法检测顺铂(DDP)对COC1/DDP细胞增殖的影响：研究分实验组7个：分辨含(0.625、1.25、2.5、5、10、20、40)μg/mlDDP,并设空白对比组1个(只含COC1/DDP细胞完全培养),其分辨作用COC1/DDP细胞24h、48h、72h之后用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测每孔光接收值(OD值)。成果可反应DDP对COC1/DDP细胞增殖的影响,同时打算DDP对细胞的克制率及IC50值。3、MTT法检测TP对COC1/DDP细胞增殖的影响：研究分实验组8个(阴性对比组、顺铂组、低浓度TP组、低浓度TP+顺铂组、中浓度TP组、中浓度TP+顺铂组、高浓度TP组、高浓度TP+顺铂组)及空白对比组1个,其分辨作用于COC1/DDP细胞24h、48h、72h之后用MTT（略..）比色法检测每孔OD值,同时打算TP对COC1/DDP细胞的克制率4、光镜跟电镜察看TP对COC1/DDP细胞状况及超微构造的影响：通过倒置光学显微镜及透射电子显微镜察看空白对比组跟中浓度TP组(10ng/ml)分辨作用COC1/DDP细胞24h后COC1/DDP细胞的状况跟超微构造的改变。5、流式细胞术检测TP对COC1/DDP细胞凋亡率跟细胞周期的影响：取对数成长期COC1/DDP细胞细胞,用流式细胞仪检测空白对比组、低浓度TP组(3ng/ml).中浓度TP组(10ng/ml)跟高浓度TP组(50ng/ml)各作用24h后细胞凋亡率跟细胞周期的变更。6、DNA电泳分析TP对COC1/DDP细胞DNA的影响：研究分空白对比组跟中浓度TP(10ng/ml)组,作用COC1/DDP细胞24h后,分辨提取两组细胞中DNA,通过1.2%琼脂糖凝胶电泳分析两组细胞DNA变更情况。7、免疫组化ElivisionTMplus法检测Caspase-7蛋白在TP作用后COC1/DDP细胞的表白情况：设空白对比组跟中浓度TP组(lOng/ml),分辨作用COC1/DDP细胞24h后,离心固定两组细胞,并按惯例方法制备石蜡块,用免疫组化ElivisionTMplus法检测两组细胞中Caspase-7蛋白表白差别。成果：1、COC1/DDP细胞成长曲线确切定通过察看COC1/DDP细胞的成长曲线,可能得悉培养3-4天为细胞的对数成长期,以（此处忽略..）此断定取培养3-4天的细胞为研究用靶细胞。2、不同浓度DDP对COC1/DDP细胞增殖的影响：DDP对COC1/DDP细胞的克制造用呈时光-剂量依附性。其药物作用24h后的IC50为5.567μg/ml,作用48h后的IC50为2.866μg/ml,作用72h后的IC50为1.161μg/ml。COC1/DDP细胞完全培养基中0.5μg/ml的DDP对COC1/DDP细胞的影响忽视不计。3、TP对COC1/DDP细胞增殖的影响：TP对COC1/DDP细胞的克制造用呈时光-剂量关联,不同浓度TP与2.5μg/mlDDP联配合用于COC1/DDP浮现协同克制造用(P0.05)。4、TP对COC1/DDP细胞状况构造的影响：4.1光学显微镜下察看：空白对比组的细胞增殖良好,细胞透光度强,细胞状况呈圆形或不规矩。TP组细胞密度较空白组减少,残余细胞胞体变小,细胞变扁平,细胞状况多样化,胞浆内颗粒增多,培养液背景中可见细胞碎片。HE染色可见COC1/DDP细胞异型性,核浆比增高,巨核或多核等改变。4.2电镜察看细胞超微构造的改变：空白对比组细胞呈卵形,细胞核为卵圆形,染色质丰富,细胞状况畸形。TP组可见细胞显凋亡改变,表示为：细胞膜名义微绒毛消散,细胞膜皱缩,胞浆稀释并呈现大小不等的空泡,细胞核染色质固缩、呈新月状凝集在核膜周边,有凋亡小体构成。5、TP作用于COC1/DDP细胞后细胞周期跟细胞凋亡率的改变：不同浓度TP作用（此处忽略..）于COC1/DDP细胞24h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况,低、中、高浓度TP组均可见细胞凋亡图像,凋亡率分辨为：(2.69±0.23)%、(5.30±0.18)%、(16.67±0.22)%,S期细胞分辨为：(48.86±0.61)%、(45.96±0.42)%、(38.72±1.11)%,G1期细胞分辨为：(35.48±0.44)%、(45.38±0.35)%、(55.34±0.67)%,G2期细胞分辨为：(15.67±0.71)%、(8.66±0.28)%、(5.94±0.90)%。成果提示,TP可促进COC1/DDP细胞凋亡,使细胞停止在G1期,跟着TP浓度增加,细胞凋亡率增加,呈量效依附关联(P0.05)。6、TP对COC1/DDP细胞DNA的影响：TP作用于COC1/DDP细胞24h后,通过琼脂糖凝胶DNA电泳分析可见细胞凋亡特点性改变的DNA图谱“梯状”条带,而空白对比组细胞未见上述表示。7、免疫组化检测TP作用COC1/DDP细胞24h后Caspase-7蛋白表白：可见细胞浆染至棕黄色,Caspase-7蛋白呈强阳性表白。而空白对比组部分细胞浆染呈淡黄色,Caspase-7蛋白弱阳性表白。论断：1、DDP对体外培养的COC1/DDP细胞有明显的克制造用,且与时光及药物浓度呈依附性。完全培养基中含浓度为0.5μg/m1DDP对COC1/DDP细胞无克制造用。2、TP对COC1/DDP有克制造用,呈时光-剂量依附关联。3、不同浓度TP结合2.5μg/ml的低剂量DDP对COC1/DDP细胞有协同克制造用。4、TP可促进COC1/DDP细胞凋亡,增加细胞凋亡率,其凋亡率的增加与TP浓度浮现剂量依附关联。（略..）TP引诱COC1/DDP细胞凋亡的可能机制是使细胞停止在G1期,影响细胞DNA合成跟有丝决裂。从分子程度察看TP通过促进细胞中DNA断裂来起效。5、在COC1/DDP细胞中,Caspase-7蛋白呈低表白,TP作用COC1/DDP细胞后,Caspase-7蛋白呈高表白,TP促进COC1/DDP细胞凋亡机制也可能与Caspase-7蛋白活性上调有关,而COC1/DDP细胞株耐药机制可能与Caspase-7蛋白活性下调有关。

以上为本篇毕业论文范文雷公藤内酯醇对耐顺铂人卵巢癌细胞体外活性影响及机制的探讨的介绍部分。

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