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羊膜制品的生物安全性及免疫原性研究

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毕业论文范文题目：羊膜制品的生物安全性及免疫原性研究，论文范文关键词：羊膜制品的生物安全性及免疫原性研究
羊膜制品的生物安全性及免疫原性研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的探讨人羊膜在制备和保存过程中的微生物安全性及其控制,为建立羊膜库提供便捷、有效的微生物控制方法。研究新鲜人羊膜的变应原性及其致敏后发生Ⅰ型变态反应的可能性。研究人羊膜的组织相容性,并对新鲜羊膜和保存“灭活”羊膜的免疫原性作客观评价,也为临床上羊膜移植的免疫安全性提供实验依据。本研究参照国际标准化组织、国家药监局等权威机构对生物材料/制品的相关规定,评价羊膜制品的生物安全性,为将羊膜制品作为新型生物材料的临床应用提供理论依据。本研究分为3部分:实验一:羊膜制备与保存中的微生物安全性研究实验二:新鲜羊膜致Ⅰ型超敏反应的变应原性研究实验三:羊膜的免疫反应和组织相容性研究方法实验一:20只剖宫产胎盘的羊膜取材后,均按不同的无菌处理程序和保存方法分组(生理盐水浸泡、庆大霉素—两性霉素B溶液浸泡;DMEM、纯甘油、纯甘油与DMEM1:1混合以及真空干燥保存。)保存检测时段为24小时、1月、3月、12月,均作细菌、真菌、支原体检测。5只顺产胎盘的羊膜,用庆大霉素—两性霉素B溶液浸泡后,重（本文此处忽略..）庆医科大学硕士研究生学位论文-4-作细菌、真菌、支原体检测。实验二:建立豚鼠全身主动过敏实验模型。分新鲜羊膜组、新鲜蛋清组(阳性对照)和PBS液组(阴性对照),每组10只豚鼠。观察豚鼠在致敏期和激发后的反应,化学荧光法检测外周血组胺含量,血液流变分析系统检测4项血液流变学指标(全血高切变率粘度、全血低切变率粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数)。实验三:建立BALB/C小鼠皮下埋植实验模型。按不同的埋植物分为新鲜羊膜组(FAM)、双层新鲜羊膜组(DFAM)、甘油保存羊膜组(GPAM)、绒毛膜组(阳性对照)和单纯手术组(阴性对照);各组又随机分为5个亚组,每组6只小鼠,分别对应术后1w、2w、4w、8w、12w共5个时相。在各检测时相,大体观察各组小鼠的活动、创面等情况,用流式细胞仪检测各亚组的外周血CD3+CD25+表达,免疫组化法半定量检测各亚组组织切片中CD3+、CD4+、CD8+、MHCⅡ+的表达,HE染色光镜下观察植片及其周围组织的变化并作炎性细胞计数。结果实验一:仅用无菌生理盐水浸泡组中,有2只胎盘的羊膜出现细菌污染（本文此处忽略..）(大肠埃希菌、表皮葡萄球菌);20只剖宫产胎盘的羊膜在其余各组中均未查出细菌、真菌、支原体污染。有1只顺产胎盘的羊膜经抗生素液浸泡后,仍查出乳酸菌。实验二:致敏期间各组豚鼠的体重变化无明显差别(P0.05);激发后羊膜组豚鼠与阴性组表现一致,无异常反应;羊膜组外周血组重庆医科大学硕士研究生学位论文-5-胺含量及4项血液流变学指标均与阴性对照无明显差别(P0.05),与阳性对照有显著性差异(P0.01)。实验三:1、大体观察移植术后各组小鼠的饮食、活动正常,创面均Ⅰ期愈合,埋植物周围软组织均未见明显坏死征象。2、外周血CD3+CD25+的表达:术后2w内,FAM组、DFAM组、GPAM组和单纯手术组外周血CD3+CD25+的表达较均术前明显增高(P0.01),术后4w逐渐回落。在各个时相,3个AM组之间两两比较均无显著差别(P0.05)。绒毛膜组外周血CD3+CD25+的表达一直明显高于其余各组(P0.01),并在术后2~4w达高峰。3、免疫组化染色检测CD3+、CD4+、CD8+、MHCⅡ+细胞表达:(1)术后同一时相不同实验组组织免疫细胞分型情况:FAM组、DFAM（略..）组和GPAM组在各个时相的CD3+、CD4+、CD8+及术后中、晚期MHCⅡ+的表达,两两比较均无显著差异(P0.05)。术后早期,FAM组和DFAM组的MHCⅡ+表达略高于GPAM组(P0.05)。绒毛膜组与3个AM组相比,CD3+、CD4+、MHCⅡ+均显著增多(P0.01)。(2)术后同一实验组在不同时相组织免疫细胞分型情况:术后2w内,FAM组、DFAM组和GPAM组均有一定量的CD3+、CD4+、CD8+、MHCⅡ+细胞浸润。此后,各型免疫细胞的表达持续明显减少,术后4w较2w前显著降低(P0.01)。术后早期,绒毛膜组的CD3+、CD4+、MHCⅡ+均明显增多(P0.01),CD4+/CD8+比值重庆医科大学硕士研究生学位论文-6-达高峰。4、HE染色:术后早期,成纤维细胞即从基质层方向渐进式浸润羊膜,原羊膜基质层的胶原结构逐渐溶解;上皮附近的成纤维细胞迅速成熟并合成胶原纤维囊、包裹羊膜植片,内层成纤维细胞于术后晚期浸及基底膜。术后1~12w,羊膜组的炎症反应均显著弱于绒毛膜组(P0.01);术后早期,新鲜羊膜移植的炎症反应略强于保存羊膜移植(P（此处忽略..）0.05),但均可自行平息。结论实验一:以“健康”剖宫产产妇的胎盘为羊膜的来源,是控制微生物安全的第一关。含1000U/ml庆大霉素、2.5μg/ml两性霉素B的医用无菌生理盐水作为制备羊膜时的抗生素浸泡液,便捷有效。严格无菌操作下的常用保存方法,可基本保证羊膜在1年保存期内免受污染。实验二:经正规无菌处理后的新鲜羊膜、保存羊膜及其他形式的羊膜制品,一般不具有变应原性,不会引起Ⅰ型超敏反应。实验三:富含活性物质的新鲜羊膜与“灭活”的保存羊膜在体内表现出几无差别的免疫特性,即免疫原性很低,可看作免疫赦免组织。羊膜有良好的组织

以上为本篇毕业论文范文羊膜制品的生物安全性及免疫原性研究的介绍部分。

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