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乙型肝炎病毒感染肝干细胞的体外研究

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毕业论文范文题目：乙型肝炎病毒感染肝干细胞的体外研究，论文范文关键词：乙型肝炎病毒感染肝干细胞的体外研究
乙型肝炎病毒感染肝干细胞的体外研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景：长期以来，人们认为乙型肝炎病毒（HBV）被清除的标志是乙肝表面抗原（HBsAg）转阴，表面抗体（HBsAb）出现，实现HBsAg血清学转换。但随着HBVDNA检测技术灵敏度及特异性的不断提高，在一些HBsAg转阴和/或HBsAb出现的患者肝脏中，仍可检测出低水平的HBVDNA；临床也发现，一些HBsAb阳性，HBV-DNA阴性的白血病患者，在使用利妥昔单抗、苯丁酸氮芥及强的松龙的治疗过程中，又出现HBsAg转阳，HBV复制再活化，乙型肝炎复发。有学者认为，这一现象可能与肝细胞中病毒核酸或cccDNA难以被彻底清除有关，但具体机制尚不清楚。基于既往研究结果，我们推测这一现象可能与H（本文此处忽略..）BV感染特殊的靶细胞即感染肝干细胞有关。肝干细胞是未分化细胞，具有幼稚细胞特点，细胞质中缺乏细胞器，不具有成熟肝细胞功能，弱表达或不表达HLA-I类抗原，因而不能有效提呈抗原而能逃避免疫，可以成为病毒长期隐匿的场所。为明确HBV感染与肝干细胞的关系，进一步了解HBV能否感染并藏匿于肝干细胞中而不被清除，我们进行了以下相关研究。研究目的：本研究通过HBV感染肝干细胞和成肝细胞的体外试验，明确HBV能否感染肝干细胞和成肝细胞，肝干细胞和成肝细胞对HBV的易感性是否存在差异，HBV在不同分化程度细胞中的感染状态是否与病毒难以被完全清除相关。研究方法：我们采用HBV感染肝干细胞及成肝细胞的体外系统（本文此处忽略..），利用间接免疫荧光、ELISA、RealTimePCR等手段，检测细胞内HBsAg，HBcAg，HBVDNA和cccDNA的表达情况，并在透射电镜下观察细胞中有无HBV颗粒产生。具体方法如下：体外分离和培养人胚胎肝脏中的肝干细胞和成肝细胞，用HBVDNA阳性血清进行感染。分别于感染后2，4，6，8天及感染后2，4，6，8，12，20，24天，收集成肝细胞和肝干细胞及其培养上清。以间接免疫荧光法检测细胞HBsAg和HBcAg表达；ELISA法检测细胞培养上清中HBsAg和HBeAg分泌情况；PCR法检测细胞中的HBVDNA及HBVcccDNA产生情况；透射电镜下观察细胞内病毒颗粒。分别以HepG2和A549细胞作为阳性对照和阴（本文此处忽略..）性对照。研究结果：成肝细胞于感染后2天开始表达HBsAg和HBcAg，PCR法可检测到细胞内HBVDNA，透射电镜观察到完整病毒颗粒。HBV感染肝干细胞后第2，4，6，8，12，16，20，24天，肝干细胞中均未检测到HBsAg及HBcAg，但感染后第4天开始细胞内有HBVDNA检出，透射电镜结果发现肝干细胞内质网中有病毒核壳体，未发现完整病毒颗粒。所有培养细胞中均未检测到cccDNA。结论：1.HBV能感染成肝细胞，病毒在细胞内能完成转录翻译装配的过程，能合成病毒抗原、核心颗粒及核壳体，并在细胞内装配形成完整病毒颗粒；2.HBV感染肝干细胞后，在细胞内以病毒核酸的形式存在，可以形成核壳体，但病毒核酸转录翻译存在缺陷，病（略..）毒抗原合成障碍，核壳体在内质网中不能组装成完整病毒颗粒；3.HBVcccDNA的形成需要一定的细胞微环境，体外培养无法完全模拟体内环境，推测体外培养细胞中HBVDNA无法形成共价闭合环状结构，这可能是HBV感染体外模型难以建立的重要原因；4.HBV感染肝干细胞后，不表达病毒抗原，病毒可以长期隐匿于细胞中，不被免疫系统识别并清除；随着肝干细胞分化为成肝细胞、成熟肝细胞，细胞结构和功能逐步完善，病毒复制可以再度活跃；因此，肝干细胞的感染是病毒难以清除的重要原因，可能与HBV感染慢性化、隐匿性感染及原发性肝癌的发生有关。

以上为本篇毕业论文范文乙型肝炎病毒感染肝干细胞的体外研究的介绍部分。

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