巨型艾美球虫NT株gam82基因表白载体的构建及其免疫保护性实验

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巨型艾美球虫NT株gam82基因表白载体的构建及其免疫保护性实验

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毕业论文范文题目：巨型艾美球虫NT株gam82基因表白载体的构建及其免疫保护性实验，论文范文关键词：巨型艾美球虫NT株gam82基因表白载体的构建及其免疫保护性实验
巨型艾美球虫NT株gam82基因表白载体的构建及其免疫保护性实验毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：鸡球虫病(Coccidiosis)是由艾美属(Eimeria)的多种球虫寄生于鸡消化道引起的一种重大迫害养鸡业发展的寄生性原虫病,目前该病的防治重要依附药物,但因为球虫耐药性的始终加强,以及药物残留肉蛋迫害人体健康,使得药物防治鸡球虫病难认为继,也迫使人们将目光转向免疫防备等调换把持方法。新型的配子体亚单位疫苗CoxAbic通过免疫种鸡,能通过母源抗体而给雏鸡提供良好的免疫保护力。但这种疫苗因须要亲跟纯化配子体,费时而且价格昂贵。为此,本研究对巨型艾美球虫南通株(E.maximaNantongstrain)配子体gam82基因进行了克隆、序列分析、原核表白跟核酸疫苗的构建,并对重组蛋白与核酸疫苗在鸡体内的免疫保护作用进行了初步（本文此处忽略..）的实验,为在临床上利用重组疫苗把持鸡球虫病奠定基本。1、E.maximaNT株gam82基因的克隆与序列分析以E.maximaNT株纯化的配子体提取的总RNA为模板,设计特异性引物,利用RT-PCR技巧扩增出gam82基因的特异性片段。将扩增片段插入pGEM-TEasy载体,转化大肠杆菌感触态细胞DH5α,经蓝白斑筛选、酶切鉴定为阳性的克隆进行测序验证。成果显示,克隆的基因全长为1791个核苷酸,存在一个完全的开放浏览框,编码596个氨基酸,其序列与E.maximaHoughton株的完全一致。用PredictingAntigenicPeptides猜测软件分析gam82基因编码区的抗原性,显示存在19个抗原决定簇,其中酪氨酸富集区所在的第282～503位（此处忽略..）氨基酸存在抗原位点达8个之多(在本研究中命名为gam82-Y区)。2、E.maximaNT株gam82基因的原核表白根据E.maximaNT株gam82抗原基因Y区的cDNA序列设计1对引物,经PCR从阳性质粒模板中扩增出目标片段。该基因片段经酶切回收后按正确的浏览框架克隆入大肠杆菌表白载体pGEX-6P-1谷胱甘肽-S-转移酶基因的下游,构建重组表白质粒pGEX-6P-1-gam82-Y,并经测序验证。重组菌经过IPTG引诱后,通过SDS-PAGE电泳跟Western-blot检测,gam82-Y基因片段在大肠杆菌中得到了融合表白,分子量约为53Ku。可溶性分析表明,融合蛋白重要以包涵体情势存在。以E.maxima高免血清为一抗进行Western-b（此处忽略..）lot检测,显示重组抗原gam82-Y存在免疫原性。3、E.maximaNT株gam82基因核酸疫苗的构建以已构建的重组质粒pGEM-T-gam82为模板,用含有EcoRI跟HindIII酶切位点的1对特异性引物扩增出gam82基因的ORF片段。将扩增片段插入pcDNA3.1载体,转化大肠杆菌感触态细胞DH5α,经Amp抗性筛选阳性克隆,提取重组质粒后用EcoRI跟HindIII双酶切鉴定,并测序验证重组质粒中gam82基因浏览框架的正确性。采取MTT法与ELISA对构建的重组质粒pcDNA3.1-gam82接种鸡体后淋巴细胞增殖与抗体程度的变更进行了检测,成果显示该核酸疫苗存在必定的免疫原性。4、重组蛋白gam82-Y跟核酸疫苗pcDNA3.1-gam82的免（文章此处忽略..）疫保护后果以黄羽肉鸡为实验动物,设计了2个实验,以均匀增重、绝对增重率与绝对卵囊产量等为评估指标,分辨对重组蛋白跟核酸疫苗的免疫保护后果进行了初步研究。成果显示:中剂量重组蛋白佐剂组跟重组蛋白中剂量组的免疫保护力低于卵囊免疫组(P0.05),但好于其余各免疫组(P0.05);核酸疫苗(pcDNA3.1-gam82)组在增重、卵囊减少率等方面雷同于重组蛋白免疫组,两组均好于不免疫攻虫组(P0.05),但仍未能达到卵囊免疫组的免疫保护程度(P0.05)。

以上为本篇毕业论文范文巨型艾美球虫NT株gam82基因表白载体的构建及其免疫保护性实验的介绍部分。

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