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~(125)I标记抗人CD40突变体单克隆抗体5H6及其在荷人卵巢癌裸鼠

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毕业论文范文题目:~(125)I标记抗人CD40突变体单克隆抗体5H6及其在荷人卵巢癌裸鼠,论文范文关键词:~(125)I标记抗人CD40突变体单克隆抗体5H6及其在荷人卵巢癌裸鼠
~(125)I标记抗人CD40突变体单克隆抗体5H6及其在荷人卵巢癌裸鼠毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:1978年Goldenberg等首次报道抗癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)抗体用于肿瘤的放射免疫显像(radioimmunoimaging,RII)进行肿瘤诊断获得成功。1980年VanNagel等首次用抗CEA多抗对卵巢癌患者进行RII,从而将RII技术引入临床,为卵巢癌的影像学诊断开辟了新的途径。卵巢癌预后差,病死率约30%,居妇科恶性肿瘤之首。而卵巢癌的早期诊断非常困难,其原因是多方面的,如卵巢位于盆腔深部,无法直接窥及,早期卵巢癌常毫无症状等。放射免疫显像为卵巢癌的早期诊断提供了有效手段。CD40分子属于TNF受体超家族成员,是相对分子质量(Mr)48KD的I型跨膜糖蛋白。目前国际上已有3株人源化抗人CD40单抗进入临床Ⅲ期,但其存在的副作用和安全性问题仍引起高度关注。本科室以往的研究发现一些肿瘤细胞株和新鲜肿瘤细胞表达CD40突变体(CD40mu)(CAC→CAA,78His→78Gln)(NCBIAssayId:ss23134804,(略..)ReferenceSNPId:rs17177493),该突变位点位于CD40胞外段第二个富含半胱氨酸的区域,这一区域是CD40与CD40L(CD154)相互作用的重要区域。基因转染细胞的构建进一步证实了该突变体与抗体的结合能力与野生型CD40截然不同,CD40mu胞外段一个氨基酸的突变可导致局部结构改变而形成新的抗原表位,该抗原表位为CD40mu所特有,CD40mu在肿瘤中的表达特点和生物学意义以及单抗激发CD40mu对肿瘤细胞生物学行为的影响有待进一步研究。本所研制的单克隆抗体(monoclonalantibody,mAb)5H6是一株鼠抗人CD40mumAb,完全不同于已报道的鼠抗人CD40mAb,它能识别多种肿瘤细胞株(HO8910、K562等)以及肿瘤新鲜组织表达的CD40mu分子,而不识别血管内皮细胞株Eahy926以及一些正常组织表达的CD40分子,显示出其潜在的应用价值。1.mAb5H6的~(125)I标记及其与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性采用氯氨-T法~(125)I标记mAb5H6(~(125)I-5H6),纸层析法测定(文章此处忽略..)~(125)I-5H6的标记率和放射化学纯度,三氯醋酸沉淀法分析~(125)I-5H6体外稳定性,细胞结合饱和实验进行Scatchard分析,lindmo法及其改良方法计算~(125)I-5H6的免疫活性分数,细胞结合实验分析~(125)I-5H6同HO8910细胞的内化和滞留。结果表明:氯氨-T法进行~(125)I-5H6标记标记率为(85.4±5.2)%,放射化学纯度为(99.2±0.5)%,在37℃血浆中存放24h后其放射化学纯度为(95.3±0.8)%,免疫活性分数达(38.6±5.4)%,~(125)I-5H6与HO8910细胞的亲和力K_d值为0.711±0.06nmol/L,最大结合位点数B_(max)为(2.17±0.08)×10~5个/cell,表明~(125)I-5H6同HO8910细胞具有很高的亲和力,可用于动物体内实验。2.~(125)I-5H6在荷人卵巢癌裸鼠体内分布及放射免疫显像选用4~6周雌性BALB/c裸鼠,建立荷人卵巢癌(HO8910)裸鼠模型,体内分布和显像前3d开始用1%KI200μL/d灌胃封闭甲状腺直至实验结束。尾静脉注射30~45μCi/200μL~(125)I-5H6,于1、3、6、24、48、96h断颈处死,取血、心、肺、肝、脾、肾、胰、胃、肠、肌肉、股骨、皮肤(本文此处忽略..)、脑、甲状腺、以及肿瘤组织称量后测量放射性计数,计算%ID/g(每克组织百分注射剂量,n=3),分析~(125)I-5H6在体内的分布;尾静脉注射300~400μCi/200μL~(125)I-5H6并用SPECT进行放射免疫显像。采用ROI(regionofinterest)技术分析T/NT值(肿瘤区域计数/对侧相应非肿瘤区域计数)。结果表明:~(125)I-5H6在荷瘤鼠瘤内48h时达到高峰,%ID/g为16.29±1.17,能特异性结合HO8910肿瘤,放射免疫显像肿瘤清晰可见。综上所述,本文采用氯氨-T法进行~(125)I标记mAb5H6,获得了高放射化学纯度、良好体外稳定性和较高免疫活性分数的~(125)I-5H6,~(125)I-5H6同卵巢癌HO8910细胞在体外具有很高亲和力,在体内能特异性结合HO8910肿瘤,SPECT进行放射免疫显像,可获得优质的放射免疫图像。本研究为不同放射性碘(~(123)I、~(125)I、~(131)I)标记mAb5H6以及建立放射免疫显像和靶向治疗方法奠定了初步实验基础,mAb5H6有可能成为以单抗为基础的放射免疫药物并为卵巢癌的诊断和治疗提供(文章此处忽略..)新的工具。


以上为本篇毕业论文范文~(125)I标记抗人CD40突变体单克隆抗体5H6及其在荷人卵巢癌裸鼠的介绍部分。
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