抑制差减杂交分析嗜水气单胞菌可能的毒力基因及gneJ基因的克隆表达与活性分析

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抑制差减杂交分析嗜水气单胞菌可能的毒力基因及gneJ基因的克隆表达与活性分析

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毕业论文范文题目：抑制差减杂交分析嗜水气单胞菌可能的毒力基因及gneJ基因的克隆表达与活性分析，论文范文关键词：抑制差减杂交分析嗜水气单胞菌可能的毒力基因及gneJ基因的克隆表达与活性分析
抑制差减杂交分析嗜水气单胞菌可能的毒力基因及gneJ基因的克隆表达与活性分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila，Ah)是一类广泛存在于水环境的机会致病菌，它不仅能引发多种水生动物的传染病，而且也是爬行类、两栖类、鸟类等动物的重要病原菌。抑制性差减杂交(SSH)一种以抑制性PCR为基础的寻找差异表达基因的方法，是细菌基因组比较，病原体中未知基因的筛选乃至分子进化分析的重要研究手段。1．采用抑制差减杂交技术(Suppressionsubtract（本文此处忽略..）ivehybridization，SSH)对嗜水气单胞菌强毒株J-1株与弱毒株MR-1株进行了基因组差异片段克隆与分析。共检出21个特异性差异片段，其中18个差异片段与气单胞菌及弧菌属基因有较高同源性，包括：黏附相关序列、调控序列、细胞分化序列、转录调节序列等，另外3个差异片段未发现有同源片段。结果表明，嗜水气单胞菌强毒株与弱毒株基因组间存在较多差异基因，为检测嗜水气单胞菌毒力株等奠定了良（此处忽略..）好的基础。2．通过Ah强毒株J-1、弱毒株MR-1之间的抑制性差减杂交(SSH)，选取其中4个可能与Ah毒力相关的片段，分别为与LPS生物合成及毒力作用有关的gne差向异构酶，调节毒力基因表达的BvgS因子，二硫化物结合蛋白异构酶DsbC，调理吞噬作用的FtsY基因。根据这4个片段的序列，设计了4对引物，用PCR方法对不同来源、不同毒力的22株嗜水气单胞菌进行了检测。结果表明，此4对引物中有3对可（文章此处忽略..）以有效地将致病株及无毒力株区分开来。此结果将有助于嗜水气单胞菌检测方法的建立．3．用PCR扩增了AhJ-1株完整的gneJ基因，将其克隆至质粒pET32a(+)，在大肠杆菌BL21中进行异源表达，SDS-PAGE结果显示重组表达蛋白的分子量约59.7kD，与理论推测值基本相同。酶活性分析表明该重组蛋白可将UDP-乙酰葡萄糖胺转化为UDP-乙酰半乳糖胺，确证gneJ基因编码蛋白为UDP-乙酰葡萄糖（本文此处忽略..）胺-4-差向异构酶。Westernblot分析显示AhJ-1胞外产物的兔抗血清可识别该重组蛋白，表明该蛋白与天然蛋白有相同的抗原性，以重组蛋白为免疫原，对小鼠进行动物保护实验，显示该重组蛋白对小鼠有60％的保护率，证实了UDP-乙酰葡萄糖胺-4差向异构酶与水生动物源性嗜水气单胞菌的毒力作用有关。

以上为本篇毕业论文范文抑制差减杂交分析嗜水气单胞菌可能的毒力基因及gneJ基因的克隆表达与活性分析的介绍部分。

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