口蹄疫病毒vp1体外表达和DNA疫苗免疫效果的研究

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口蹄疫病毒vp1体外表达和DNA疫苗免疫效果的研究

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毕业论文范文题目：口蹄疫病毒vp1体外表达和DNA疫苗免疫效果的研究，论文范文关键词：口蹄疫病毒vp1体外表达和DNA疫苗免疫效果的研究
口蹄疫病毒vp1体外表达和DNA疫苗免疫效果的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：口蹄疫(footandmouthdisease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物多发的一种急性、热性和传播极为迅速的接触性传染病。目前，针对预防口蹄疫疾病的爆发和流行，多数发展中国家主要采用注射病毒灭活疫苗的方法。但灭活疫苗存在灭活不彻底和保护期短等缺点。因此，新型口蹄疫疫苗及免疫策略的研究已成为亟待解决的焦点。本研究主要开展O型口蹄疫病毒（新疆株）vp1基因的真核酵母表达、化学佐剂及蛋白疫苗和核酸疫苗联合免疫增强FMDVvp1DNA疫苗免疫效果的研究。将FMDVvp1基因克隆到毕赤酵母Pichiapastoris分泌性表达载体pSuperY中，获得酵母重组表达载体pSuperY/vp1，经测序证明vp1基因序列的正确性。将纯化的重组质粒（本文此处忽略..）经线性化酶切后，用电转化法将pSuperY/vp1转化导入毕赤酵母菌种SMD1168H中。对重组酵母表达产物用SDS-PAGE和Westernblot进行分析，并用酵母表达的FMDVVP1蛋白免疫小鼠。结果重组质粒pSuperY/vp1转化毕赤酵母菌后能够表达相对分子量（Mr）为66,000和43,000的FMDVVP1蛋白，动物免疫结果表明FMDVVP1蛋白能够诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答。DNA传递是基因表达与功能研究及其医学应用的重要技术，安全高效的DNA传递一直是研究者期待的目标。利用一种新的阳离子多聚物脱乙酰甲壳胺-16介导重组质粒pcDNA3/vp1转染COS-7细胞，RT-PCR可检测到目的基因vp1在mRNA水平的表达，实时定量PCR结果表明其转染效率（本文此处忽略..）高于脂质体与磷酸钙法，同时还对转染条件进行了探讨。DNA结合分析发现脱乙酰甲壳胺-16能够与DNA形成核酸纳米颗粒，提高DNA稳定性，促进真核细胞转染效率的提高。结果表明脱乙酰甲壳胺-16确能做为一种新型的非病毒纳米DNA传递载体，并将可能在基因表达与功能研究及基因治疗等领域发挥重要作用。将FMDVvp1cDNA克隆至真核表达载体pcDNA3上，体外酶切鉴定正-3-WP=6新疆大学硕士论文确的重组质粒pcDNA3-vp1转染COS-7细胞，通过RT-PCR的方法确认重组质粒在COS-7细胞中mRNA的表达。随后将100μg重组质粒pcDNA3-vp1分别与0.25%普鲁卡因、1%左旋咪唑、5%乙醇、1.5%Tween80和0.9%NaCl混合免疫接种小鼠，对照组注射质粒pcDNA3，比较不同化学（此处忽略..）佐剂对小鼠免疫反应的影响效果。结果发现重组质粒pcDNA3-vp1能够在真核细胞中有效的转录表达；不同的化学佐剂与重组质粒混合免疫均可诱发小鼠机体产生针对FMDVVP1的特异性体液免疫和细胞免疫；1%佐旋咪唑实验组所诱发的IgG2α水平最高，T细胞扩增活性及DTH反应最强，说明1%佐旋咪唑能够增强DNA疫苗的Th1型免疫反应?。结果表明化学试剂左旋咪唑能够增强?DNA疫苗的免疫效果，可以作为新型高效的DNA疫苗的化学佐剂。DNA疫苗由于能同时诱导机体产生特异性的体液和细胞免疫反应等优点，已经成为研究者关注的焦点之一。但单独使用DNA疫苗在大动物体或人体只能诱导低水平的免疫反应，必须利用佐剂或改进免疫策略等方法增强其免疫原性。最近的研究发现，核酸疫（文章此处忽略..）苗触发，重组病毒疫苗或蛋白疫苗加强的prime-boost免疫策略能够明显的提高疫苗对动物的保护力。考虑到该方法在实际应用时存在的不便，我们在研究中采用将质粒DNApcDNA3-vp1和口蹄疫灭活疫苗或酵母重组VP1蛋白联合免疫的策略。结果prime-boost方法的确能够同时提高小鼠和牛产生的针对FMDV的特异性体液免疫和细胞免疫；将DNA与蛋白混合同时注射后，虽然提高了抗体分泌水平，却抑制了动物体外T细胞增殖和体内DTH等细胞免疫反应，特别是抑制了Th1型细胞因子的表达。

以上为本篇毕业论文范文口蹄疫病毒vp1体外表达和DNA疫苗免疫效果的研究的介绍部分。

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