抗除草剂bar基因表白载体的构建及农杆菌转化的研究

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抗除草剂bar基因表白载体的构建及农杆菌转化的研究

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毕业论文范文题目：抗除草剂bar基因表白载体的构建及农杆菌转化的研究，论文范文关键词：抗除草剂bar基因表白载体的构建及农杆菌转化的研究
抗除草剂bar基因表白载体的构建及农杆菌转化的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：杂草与农作物竞争水分、养料跟光照，影响农作物的产量、品德，还是很多病害的旁边寄主或越冬场合，通过除草剂来把持杂草已成为古代化农业不可缺乏的一部分。但除草剂在毁灭杂草的同时也对作物产生了侵害作用。目前，利用基因工程手段培养抗除草剂的作物品种解决了这一抵触。广谱、非抉择性除草剂Basta的活性成分是草丁膦(Phosphinothricin)。草丁膦除草作用机理是克制动物的氨基酸生物合成酶—谷氨酰胺合成酶(GS)，使杂草产生氨中毒。bar基因编码草丁膦乙酰CoA转移酶(PAT)，可催化草丁膦的自由氨基乙酰化，从而使除草剂草丁膦失活。而且bar基因也是迄今为止利用最为广泛的一个抗除草剂抉择标记基（略..）因，克隆出bar基因对动物的遗传转化，基因表白跟生理学研究都有重要的作用。本实验从抗除草剂转基因Bobwhite小麦中，利用PCR克隆的方法扩增出bar基因全长，并在原核表白体系中表白，鉴定表白蛋白的活性，将可能正确编码PPT乙酰转移酶的bar基因片段，经过恰当的润饰构建入真核表白载体。并将此构建的真核表白载体转化农杆菌获得工程菌，为基因转化及农杆菌转化做了前提工作。并对农杆菌转化小麦体系作了初步的研究，为选育出合适在安徽麦区种植的高产、优质、抗除草剂小麦新品种做了基本工作。本实验研究成果表明：1．利用PCR方法对已知序列基因的克隆是简单有效的方法，但很多因素影响PCR的特异性（此处忽略..），其中退火温度起着关键性作用。本实验采取了高保真pfuDNA聚合酶，在退火温度61℃前提下从转基因Bobwhite品种基因组DNA中扩增出特异性片段，将此片段插入克隆载体pGEM-7fz(+)，经测序跟序列分析表明，所扩增得到的片段含有bar基因完全的读码框，并且序列与GenBank中发表的序列完全一致。2．选用pET32a表白载体跟BL21trxB(DE3)宿主菌的原核表白体系，对扩增得到的片段进行表白鉴定。经IPTG引诱表白的融合蛋白的分子量39.6kDa，目标片段表白蛋白分子量20.1kDa，与预计的分子量20.0kDa相符。并且表白的蛋白酶(PAT)经DTNB比色法鉴定，存在酶活性。3．为了目标基因在真核生物中有效的（文章此处忽略..）翻译跟表白，通过PCR方法对bar基因起始密码子ATG旁侧序列进行改革。改革后的目标基因克隆于真核表白载体pBI121，构建表白载体pBI121-bar，通过三亲杂交法将真核表白载体pBI121-bar转入农杆菌LBA4404，成功构建出工程菌。4．小麦离体培养中，基因型、培养基激素浓度与外植体类型是影响小麦胚性愈伤组织引诱跟再生频率的3个重要因素。基因型的影响重要影响到胚性愈伤组织的产生频率，以幼胚为外植体杨麦87158可能达到sl．35％，而安农92484只能达到16．sl％。在所试的品种中对成熟胚在2，4D品质浓度为4．omg／L时出愈率跟胚性愈伤组织引诱率达到最大值，而对幼胚不同品种表示有所差别，其中杨麦87158跟安农98005在2，4＊浓度为2．omg（本文此处忽略..）多少时胚性愈伤组织引诱率最高，而安农92484则是在4．omg多少时后果较好。同时研究表明不同外植体不仅影响到出愈率，更重要影响胚性愈伤组织的构成。5．在转化后抗性愈伤组织筛选中，适应的PPT筛选浓度为3刀mg多少，Cef有效抑菌浓度为200pg／ml，乙酚丁香酮有效引诱浓度为100pmol多少，0．5％名义活性剂Tween20，可能使GUS染色均匀，但并不是T－DNA转移所必须，盐的浓度对T－DNA转移影响不大。

以上为本篇毕业论文范文抗除草剂bar基因表白载体的构建及农杆菌转化的研究的介绍部分。

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