表皮细胞成长因子对人脐带间充质干细胞向汗腺细胞转化的影响

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表皮细胞成长因子对人脐带间充质干细胞向汗腺细胞转化的影响

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毕业论文范文题目：表皮细胞成长因子对人脐带间充质干细胞向汗腺细胞转化的影响，论文范文关键词：表皮细胞成长因子对人脐带间充质干细胞向汗腺细胞转化的影响
表皮细胞成长因子对人脐带间充质干细胞向汗腺细胞转化的影响毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目标：本研究利用人工体外汗腺细胞伤害的微环境,引诱人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)向汗腺细胞转化,并通过检测不同组别抗原的表白情况,探讨表皮细胞成长因子(EGF)对转化的影响,以及在转化过程中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)信号通路的作用,为临床利用人脐带间充质干细胞重建汗腺提供实际根据。方法：无菌前提下获得足月妊娠分娩胎儿的脐带,将其用剪刀剪切成4cm左右长短的脐带组织段,无菌生理盐水反复冲刷干净,除去脐带中残留的血液,剔除血管(一条脐静脉,两条脐动脉)以避免被血管内皮细胞传染。取出脐带中的华通胶组织(Wharton'sJelly),撕裂成条索状,用剪刀将其剪成大小约1mm3的Wharton'sJelly组织块,将组织块置于培养瓶中,采取组织块培养法得到脐带间充质干细胞(UC-MSCs),流式细胞术检测其名义抗原表白情况；取人头、面、颈部畸形全层皮肤,用Ⅱ型胶原酶消化法获得汗腺组织,培养汗腺细胞(h-SGCs)贴壁成长,免疫组织化学法检测其为纯化的h-SGCs；根据干细胞引诱分化的微环境实际,将h-SGCs行热伤害处理,消化后种植于transwell小室,将第四代的UC-MSCs种植（此处忽略..）于transwell板下层,引诱间充值干细胞向汗腺细胞表型转化,并根据处理因素不同,分为四组,组1：对比组,UC-MSCs用h-SGCs培养基培养,不加热休克h-SGCs；组2：UC-MSCs用h-SGCs培养基培养,于transwell小室中放入热伤害h-SGCs进行引诱；组3：在组2基本上,参加50ng/ml的EGF；组4：在组2基本上参加10ng/ml的PD98059。一周后用流式细胞术检测共培养的UC-MSCs的CK7、CK19表白率,用免疫组织化学法检测其CK19、CEA的染色情况,并利用SPSS13.0统计软件进行数据统计分析。成果：(1)流式细胞技巧检测显示：①培养传代的UC-MSCsCD14、CD29、CD34、CD44、CD45、CD105、CK7、CK19阳性率分辨为0.6%,91.3%,0.6%,99.1%,0.9%,99.2%,0.8%,0.9%。其中CD29、CD44、CD105为干细胞名义标记物,表白率高,CD14、CD34、CD45为造血干细胞名义标记物,多少乎不表白,证明培养获得的细胞为纯化的间充质干细胞。CK7、CK19在培养的细胞中的阳性率很低,阐明UC-MSCs畸形情况下不表白CK7、CK19等标记物。②对各组进行流式细胞术检测,组1CK7、CK19阳性率分辨为：(2.20±1.51)%,(2.23±0.68)%；组2CK7、CK19阳性率分（文章此处忽略..）辨为(6.37±0.74)%,(5.73±0.32)%：组3CK7、CK19阳性率分辨为(14.3±0.96)%,(12.57±1.06)%：组4CK7、CK19阳性率分辨为(2.30±1.08)%,(2.13±0.61)%。CK7统计成果显示,组1跟组4不明显统计学差别(P=0.999＞0.05),组2与组3的表白阳性率明显高于这两组,组2与组1(P=0.005＜0.05),组3与组1(P=0.000＜0.05),且组3高于组2(P=0.001＜0.05)。CK19统计成果显示,组1跟组4不明显统计学差别(P=0.997＞0.05),组2与组3的表白阳性率明显高于这两组,组2与组1：(P=0.005＜0.05),组3与组4：(P=0.000＜0.05),且组3高于组2(P=0.001＜0.05)；(2)免疫组织化学染色成果：培养的人UC-MSCs的CEA跟CK19免疫组织化学染色为阴性,培养的UC-MSCs不表白CEA跟CK19,因为CEA跟CK19名义抗原相结合可作为汗腺细胞的标记物,阐明其不存在汗腺细胞的表型；而获得的汗腺细胞的CEA跟CK19染色均为阳性,证明为纯化的汗腺细胞。不同前提下培养的各组细胞均有部分细胞表白CEA跟CK19阳性,其中组3表白阳性细胞数最高。每组选取6个视线打算各组细胞表白CEA的阳性率,组1的CEA均匀阳性率为(3.33±0.71)%；组2的CEA均匀阳性率分辨为(7.43±1.01)%；组3后的UC-MSCs的CEA均匀阳性率分辨为(17.63±2.31)%；组4的CEA均匀阳性率分辨为(3.17±0.35)%。统计成果显示,组1跟组4不明显统（本文此处忽略..）计学差别(P=0.997＞0.05),组2与组3的阳性表白率明显高于这两组,组2与组1：(P=0.005＜0.05),组3与组1：(P=0.000＜0.05)，且组3高于组2：(P=0.001＜0.05)。(3)Westernblot:组1至组4各组的OD值分辨为：组1：(0.64±0.026),组2：(0.79±0.049),组3(1.20±0.032),组4(0.62±0.042),组1与组4之间p-ERK表白绝对强度无统计学差别(P=0.9100.05),组3表白绝对强度最高,其次是组2,与组1统计分析后的差别分辨为：(P=0.000＜0.05)、(P=0.003＜0.05),并且组3的表白强度高于组2。论断：UC-MSCs与热伤害的h-SGCs经transwell板间接独特培养后,部分UC-MSCs名义抗原CK7、CK19、CEA表白阳性,证明已存在h-SGCs的表型,提示体外h-SGCs伤害的微环境存在促进UC-MSCs向h-SGCs分化的作用；而在培养基参加50ng/mlEGF的组3的细胞名义抗原阳性率明显高于组2跟对比组,参加ERK信号通路特异性克制剂PD98059的组4与对比组阳性表白率不统计学差别,并且低于组2跟组3,证明EGF可能明显促进UC-MSCs向汗腺细胞转化,并且ERK通路在通过共培养的方法引诱UC-MSCs向h-SGCs转化以及EGF促进UC-MSCs向汗腺细胞转化过程中发挥了重要作用。

以上为本篇毕业论文范文表皮细胞成长因子对人脐带间充质干细胞向汗腺细胞转化的影响的介绍部分。

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