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新型细胞芯片的构建及初步应用

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毕业论文范文题目:新型细胞芯片的构建及初步应用,论文范文关键词:新型细胞芯片的构建及初步应用
新型细胞芯片的构建及初步应用毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:前言近年来,随着后基因组时代的到来,生物芯片技术得到了迅猛发展,而且已经成为现今生物学的关键技术。包括基因芯片、蛋白芯片、细胞芯片在内的不同功能的生物芯片相继问世。基因芯片是一种提取生物分子信息的有力工具,利用基因芯片可大规模进行DNA或RNA信息分析。它不但可以应用于疾病发病机理、功能基因组学等方面的基础研究,还可以用于遗传病检测、感染性疾病检测、肿瘤相关基因检测等多方面的疾病诊断及法庭证物、环境保护、药物筛选等多方面应用。蛋白芯片可以将蛋白质以阵列的方式固定在经化学或生物酶处理的表面上,也可将受体蛋白、抗体等固定在表面上,未知分子可以利用与芯片不同位点亲和力来分析。蛋白芯片可以进行免疫分析,研究蛋白质与蛋白质相互作用。组织芯片技术是美国国家人类基因研究所的Kononen教授等建立的一种新的高产出的芯片技术,它可以将数十个甚至上千个不同个体的临床组织标本按预先设计的顺序排列在一张玻片上进(略..)行分析研究,是一种高通量、多样本的分析工具。人体是由细胞组成的,细胞正常结构和功能的异常,必然导致细胞乃至人体各组织器官的结构和功能的紊乱,并由此引起疾病。要正确认识各类疾病,探讨疾病的病因,以达到治疗和预防目的,显然细胞学在临床医学的研究中是十分重要的。我们设计了一种新型的细胞芯片,其原理是充分利用玻片的硬度高,透明性好的特点,应用细胞膜表面不同的抗原物质,与包被在玻片上的不同抗体发生特异性结合,通过一次实验可以将被测细胞悬液中不同膜表型的细胞分离、固定在同一张玻片的不同特定区域,保持了细胞的完整性及活性,又可通过简单的操作一次将多细胞悬液进行免疫分群。可以按照不同临床需要,设计不同的抗体组合,进一步降低成本,提高疾病的检出率,更好的为广大的病人服务。材料与方法将CDZ,CD3,CD4,CDS,CD7,CDS,CDg,CD10,CDlla,CD13,CD14,CD15,CD19,CD20,CD22,CD30,CD33,CD34,C侧(此处忽略..),CD44v6,CD45,CD45RA,CD66e,CD68,HLA-DR等抗体按照需要固定于醛基玻片上,形成微阵列,构建出细胞芯片A、细胞芯片B(白血病兔疫分型)和细胞芯片C(淋巴瘤免疫分型)三种细胞芯片。从20例健康志愿者、20例淋巴细胞白血病病人0.5-Illil全血中和20例淋巴瘤病人胸水中分离出的单个核细胞,其中一部分用丫陡橙预染5dn,经PBS洗涤3次后与细胞芯片杂交,与细胞芯片杂交,形成特异性选择细胞群。将杂交后的细胞芯片进行胎盘兰染色、瑞氏染色、CD3-Cys+CD4-FITC+CDS-RPE三色荧光染色、巴氏染色等并观察结果。结果该芯片能选择性的结合不同免疫表型的细胞。胎盘兰染色显示活细胞数>95呢;瑞氏染色细胞形态良好,杂交点边缘整齐,背景干净;荧光染色显示特异性良好。急性淋巴细胞白血病病人与健康志愿者的淋巴细胞免疫表型有十分明显的差别人淋巴细胞白血病中3例CD3+、2例CD4+、2例CD7+和1例CDS+*淋巴细胞白血病中二例CD(略..)10+、5例CD19+、3例CD20+和2例HLA-DR+,并显示了明显的单克隆增生的恶性肿瘤的性质,符合临床诊断。淋巴瘤病人胸水中有大量幼稚淋巴细胞,其中3例CD3+、4例CD4+,属T细胞淋巴瘤,3例CD19+、7例CD20+、3例CD22+,属B细胞淋巴瘤,阳性点上的细胞与非阳性点上细胞无论在细胞数量、细胞大小、形态规则性上都有明显的不同,用显·2·微镜观察更是明显。结论众所周知,形态学在细胞学检查中的重要作用是任何一种方法取代不了的。可以看到,我们的细胞芯片所捕获的细胞很均一,纯度高,而且是单层细胞,十分严格的被限定在特异性区域。通过扫描电镜的观察,细胞保存十分完好,能清楚的看到淋巴细胞膜上的皱稻和刺状突起,所以可用于进行更为深人的研究。在一张小小的玻片上可以根据需要排布多种抗体,能将细胞自动分成不同类群。本实验方法所需的细胞数量要比卜dssa的要少得多,因为他的试验样品的细胞在6X10勺L时,很少甚至没有杂交信号被检测到。我们的试(略..)验可以使细胞的量减少到10VL或更少,只要增加摇晃次数就可富集同类细胞。尤其对于象血液、胸腹水等细胞种类很多的细胞悬液,十分有效。即使细胞数量很少,所产生的信号不足以被仪器扫描到时,也可以使用普通光学显微镜直接观察结果。本实验是利用了蛋白质的氨基端(NH*可与醛基(CHO)发生共价结合,将蛋白质固定在醛基玻片上,在玻片上形成CD抗体微矩阵。我们选用玻片做为载体,使操作简单易行,它的突出优点透明性好,可以用普通光学显微镜直接观察细胞形态,实现了免疫学与形态学相结合。本实验所构建的细胞芯片在白血病免疫分型中应用的优势是十分明显的。急性白血病是一种单克隆增生性疾病,由于某种原因,某一蛋白大量增生。大量异常细胞仅集中在某一抗体点上,而其


以上为本篇毕业论文范文新型细胞芯片的构建及初步应用的介绍部分。
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