抗禽流感病毒H5N1分泌型IgA在CHO细胞中的表白及免疫学活性分析

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抗禽流感病毒H5N1分泌型IgA在CHO细胞中的表白及免疫学活性分析

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毕业论文范文题目：抗禽流感病毒H5N1分泌型IgA在CHO细胞中的表白及免疫学活性分析，论文范文关键词：抗禽流感病毒H5N1分泌型IgA在CHO细胞中的表白及免疫学活性分析
抗禽流感病毒H5N1分泌型IgA在CHO细胞中的表白及免疫学活性分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：禽流感(Avianinfluenza,AI)是由甲型流感病毒引起的一种以侵害呼吸体系为主的疾病,极大地迫害人类健康跟畜牧业出产,并重大影响国度的经济发展。禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)基因组极易产生变异,造成病毒的多型性,给禽流感防治带来很大难度。目前,还不明白哪些特异渐变可能使H5N1病毒能牢固地在人-人之间传播,然而一旦产生H5N1病毒渐变导致对人的特异性,将会给人类造成重大灾害。人们对禽流感的防备与医治重要集中在疫苗跟抗病毒药物两种方法上,而疫苗从打针到产生保护性抗体须要较长时光。因为禽流感病毒对离子通道克制剂、神经氨酸酶克制剂等化学药物轻易产生抗性,这将都会影响疾病的把持后果。近两年来有关禽流感被动免疫防备跟医治的研究是禽流感研究的热点之一。利用抗体系剂对禽流感进行被动免疫防备跟医治,可能在利用之后破刻产生防护后果,从而可能补充疫苗跟化学药物的不足。禽流感是一种呼吸道感染（文章此处忽略..）病,感染道路重要是呼吸道跟消化道。分泌型IgA(SecretoryIgA,SIgA)抗体在这里存在重要作用,作为一种被动免疫制剂,在病毒感染产生的早期阶段给药,可有效地抵抗病毒的感染。另外,因为通过滴鼻/喷雾或口服/灌胃即可给药,这种非体系的、部分的用药方法不仅便利、保险,而且本钱较低。因此,研究呼吸道或消化道分泌型IgA对禽流感病感染的阻断作用,存在潜在的利用价值。分泌型IgA抗体在构造跟功能上还存在独特的特点,与个别的IgG跟IgA抗体分子比拟,SIgA抗体有很多精良的特点。SIgA由2个IgA构成,故其与抗原的结合价比较高,存在较高的抗体活性。因为分泌片的存在,使SIgA可能抵抗酸跟蛋白酶的降解,进步了SIgA的牢固性,有研究表明,SIgA分子可能在人体外分泌道存在四个月以上。此外,分泌片存在非特异性的病原体结合活性,从而使SIgA存在非特异的免疫保护作用;分泌片使SIgA整洁规矩地排列在粘膜（略..）名义构成隔离保护层,可对病原微生物的入侵产生物理防护作用。本研究利用基因工程手段,通过牢固转染CHO/dhfr-细胞系,构建了牢固表白分泌型IgA的单克隆细胞系,具体研究内容跟成果如下:1分泌片SC跟IgJ基因真核表白质粒的构建分泌型IgA相干基因(SC、IgJ基因、人IgA重链恒定区、人Kappa链恒定区)的克隆、抗H5N1单克隆抗体可变区基因(重链、轻链可变区)以及轻重链真核表白质粒的构建已由本实验室在前期工作中实现。基于优化的实验打算,咱们又将SC、IgJ基因克隆到了含有Zeocin抗性基因的真核表白载体pcDNA4/HisA中,构建了SC跟J链的真核表白载体pCDNA4-IgJ、pCDNA4-SC。2抗H5N1-HA嵌合SIgA抗体在CHO细胞中的表白及免疫学特点分析将抗H5N1抗体轻、重链真核表白质粒转染CHO/dhfr-细胞,筛选牢固分泌表白抗H5N1病毒的IgA抗体的单克隆细胞系,制备嵌合IgA单体抗体,并对其免（此处忽略..）疫学特点进行分析;而后在牢固表白IgA单体的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞系的基本上,共转染SC跟J链真核表白质粒,利用Zeocin抗生素筛选分泌SIgA的单克隆细胞,通过ELISA跟Westernblotting分析了细胞培养上清中SIgA的表白情况,并证明表白的SIgA抗体存在完全的十聚体构造,而且ELISA实验也表明SIgA抗体与H5N1HA抗原存在很好的结合才能。3进步SIgA抗体表白量的相干研究氨甲喋呤(MTX)是二氢叶酸还原酶(DHFR)克制物,当培养基中存在MTX时,MTX可浸透细胞内与DHFR蛋白结合,使核苷酸的合成碰壁,只有DHFR基因得到扩增的克隆才干存活。DHFR基因的扩增使其附近的DNA得到扩增,从而进步与之毗连的外源基因的表白程度。MTX加压程序是,先将待加压的细胞株传入细胞培养瓶中,将培养液换成含5nMMTX的加压培养基。当培养的细胞长到汇合度90%时,以1:4传代,持续传五代,而后换成25nM的M（略..）TX加压培养基,以此类推,终极加压浓度为125nM。MTX加压程过程中采取96孔板倍比稀释的方法筛选加压后的SIgA单克隆细胞系,获得表白量较高的细胞株。4分泌型IgA的发酵培养及纯化将SIgA单克隆细胞无血清培养驯化2个月,采取CDCHO培养基(含必定浓度的MTX),逐步降落DMEM跟透析血清浓度,直至其完全适应CDCHO成长;悬浮培养2-4周,培养基仍为CDCHO(含加压浓度的MTX)。收集细胞培养上清1L左右利用Protein-L的亲跟层析柱进行纯化。5分泌片SC单克隆抗体的制备在SIgA抗体检测过程中,须要大量SC单抗,咱们首先构建了原核表白载体pQE80L-SC,然掉队行SC蛋白的引诱表白,SC蛋白经过纯化回收免疫小鼠,制备了2株单克隆抗体,并利用这些抗体树破了SIgA的疾速诊断检测方法。

以上为本篇毕业论文范文抗禽流感病毒H5N1分泌型IgA在CHO细胞中的表白及免疫学活性分析的介绍部分。

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