猪感染性胃肠炎病毒重组N蛋白的表白纯化及其单克隆抗体的研究

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猪感染性胃肠炎病毒重组N蛋白的表白纯化及其单克隆抗体的研究

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毕业论文范文题目：猪感染性胃肠炎病毒重组N蛋白的表白纯化及其单克隆抗体的研究，论文范文关键词：猪感染性胃肠炎病毒重组N蛋白的表白纯化及其单克隆抗体的研究
猪感染性胃肠炎病毒重组N蛋白的表白纯化及其单克隆抗体的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：猪感染性胃肠炎是由猪感染性胃肠炎病毒（TransmissibleGastroenteritisvirusofswine，TGEV）引起的一种高度接触性的肠道感染性疾病，目前该病尚缺乏有效的医治药物，疫苗接种便成为防备该病的重要办法之一。本研究利用分子生物学手段，根据GenBank中录入的TGEV全基因组序列，用Oligo6.0软件设计一对引物，以TGEV-RNA为模板，利用RT-PCR扩增其N基（文章此处忽略..）因并进行克隆。将原核表白载体pET-32a(+)与目标基因分辨双酶切，连接转化，筛选阳性质粒，并命名为pET-32a(+)-N。将阳性重组质粒pET-32a(+)-N转化到大肠杆菌（Escherichiacoli）BL21中，在IPTG终浓度0.1mmol/L跟37℃前提下引诱，外源基因获得高效表白。利用一站式His标记蛋白质微量纯化套装纯化TGEV-N蛋白，获得纯化的重组N蛋白。以纯化的TGEV重组N蛋白作为包被抗原，树破了（此处忽略..）检测猪感染性胃肠炎抗体的间接ELISA方法。断定了抗原最佳包被浓度为10μg/mL，抗体稀释度为1:40，封闭液跟抗体稀释液为含10%犊牛血清的PBST，酶标二抗的浓度为1:40000。与SvanovaTGEV/PRCV抗体诊断试剂盒比较，两者的总合乎率为75%。利用纯化的TGEV重组N蛋白免疫Balb/c小鼠，按惯例方法进行融合，经间接ELISA方法筛选，采取有限稀释法进行3次克隆筛选，获得了3株（分辨命名为1-27，2-7，2-15）特异性（本文此处忽略..）好并能牢固分泌抗TGEV-N蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过小鼠腹腔打针杂交瘤细胞，获得腹水即为单克隆抗体，间接ELISA检测其效价均为10~6；这3株单抗的亚类均为IgG1；在间接免疫荧光实验中，3株单抗均仅能与TGEV感染细胞反应，浮现细胞胞浆以及胞膜的特异性亮绿色荧光，而与感染的PCV2、PRV跟PRRSV的细胞未呈现荧光，均为阴性；免疫印迹分析成果显示，3株单抗均能辨认TGEV的同一条带，与预期（此处忽略..）蛋白（43.5KDa）大小一致。论断：（1）获得了纯化的重组TGEV-N蛋白；（2）以纯化的的重组TGEV-N蛋白为包被抗原树破了检测TGE抗体的间接ELISA方法；（3）获得并制备了3株抗TGEV-N蛋白的单克隆抗体。这些成果为进一步发展TGEV的免疫学诊断方法奠定了基本。

以上为本篇毕业论文范文猪感染性胃肠炎病毒重组N蛋白的表白纯化及其单克隆抗体的研究的介绍部分。

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