PRRSV M蛋白的表白及其CD4~+T细胞表位上风区鉴定

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PRRSV M蛋白的表白及其CD4~+T细胞表位上风区鉴定

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毕业论文范文题目：PRRSV M蛋白的表白及其CD4~+T细胞表位上风区鉴定，论文范文关键词：PRRSV M蛋白的表白及其CD4~+T细胞表位上风区鉴定
PRRSV M蛋白的表白及其CD4~+T细胞表位上风区鉴定毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：猪繁殖与呼吸妨碍综合征(PorcineReproductiveandRespirationSyndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种高度接触性感染病,以母猪的生殖妨碍跟成长猪及仔猪的重大呼吸道疾病为重要特点。是目前迫害养猪业的感染病之一。该病毒有4种糖基化蛋白GP2、GP3、GP4、GP5跟2种非糖基化蛋白M跟N蛋白,其中,M蛋白能引诱细胞免疫反应。目前用于防备PRRS的疫苗有弱毒苗跟灭活苗。弱毒苗引诱的抗体只能抵抗同源毒株的入侵,同时有散毒的危险。灭活苗引诱产生的抗体程度很低,不能产生足够的免疫保护,常导致免疫失败；同时,高滴度的抗体不能清除病毒,而且能产生抗体依附性（文章此处忽略..）加强作用。而细胞免疫在疾病的防备中起到了至关重要的作用。本研究利用原核表白体系对江苏分别的高致病性毒株的M基因进行分段表白,初步鉴定其CD4+T细胞表位上风区域。利用RT-PCR方法从PRRSV江苏毒株中克隆得到了大小约649bp片段的M蛋白基因,将其克隆到pMD-18T载体掉队行测序。利用DNAstar软件进行分析,成果表明该江苏株属于美洲型,同时将其与VR2332、BJ-4、CC-1、CH-1a、HB-1、Hn-1、JXwn06、resp、S1、HUB2、HEB1、JXA1、LV等分别株进行了同源性分析,与最近多少年分别的HUB2、HEB1、JXA1、JXwn06同源性极高,核苷酸同源性达到99%以上,氨基酸同源性达99.4%,而与其余毒株同源性绝对（文章此处忽略..）较远,变异株M蛋白基因序列与美洲经典毒株VR2332M蛋白基因序列核苷酸跟氨基酸序列的同源性分辨为94.9%跟97.1%,可见M蛋白基因长短常保守的,其毒株的变异并不影响M蛋白的免疫活性.所以,M蛋白T细胞免疫上风区的筛选跟鉴定对下一步开发有效的新型疫苗来说长短常重要的。研究表明CD4+帮助性T细胞表位均为双亲性的α螺旋,采取DNAstar对M蛋白构造跟其双亲性进行分析进行分析的基本上,将其进行分段表白,根据PRRSV江苏株M基因序列设计表白引物,扩增出两端带有BamHⅠ跟HindⅢ的M1(294bp、AA78-174)、K1(AA78-112)、K2(AA98-131)、K3(AA118-153)、K4(AA139-174)蛋白基因,亚克隆到原核表白载体pET32a+中构建了重组表白质粒pET-M1、K1、K（文章此处忽略..）2、K3、K4,转化BL21表白菌,在IPTG的引诱下成功表白,获得了大小约为30.8KD跟24.4KD的融合蛋白M1、K1、K2、K3、K4-His,通过对表白前提进一步优化,均获得高效表白。经SDS-PAGE跟Westernblot鉴定,这些蛋白均存在良好的抗原性,表白量约占细菌总蛋白量的39%左右。利用镍树脂层析纯化柱对重组融合蛋白进行纯化,纯化的融合蛋白经SDS-PAGE鉴定,目标蛋白纯度高达95%以上。用M1蛋白免疫BALB/C小鼠,并设PRRSV全病毒对比组。于三免后两周采血。小鼠血清中未检测到有中跟抗体的存在。并从小鼠脾脏分别淋巴细胞,分辨用K1、K2、K3、K4蛋白进行体外刺激。流式细胞仪检测分泌IFN-γ细胞因子的T细胞的频（文章此处忽略..）率,成果用SPSS软件分析,两个免疫组K1蛋白与对比比拟较,差别均明显(P≤0.01),用蛋白进行体外刺激后,其中M1蛋白免疫组,K1蛋白刺激后分泌IFN-γ的细胞比率达到1.01%,而相应的全病毒组为0.24%,其它蛋白分辨与对比组比较,差别均不明显。实验成果表明M蛋白K1(AA78-112)可能是T淋巴细胞表位上风区。

以上为本篇毕业论文范文PRRSV M蛋白的表白及其CD4~+T细胞表位上风区鉴定的介绍部分。

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