鸡白细胞介素2在毕赤酵母中的表达与生物活性分析

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鸡白细胞介素2在毕赤酵母中的表达与生物活性分析

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毕业论文范文题目：鸡白细胞介素2在毕赤酵母中的表达与生物活性分析，论文范文关键词：鸡白细胞介素2在毕赤酵母中的表达与生物活性分析
鸡白细胞介素2在毕赤酵母中的表达与生物活性分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：家禽传染性疾病是养禽业中最大的威胁,给养殖业造成严重经济损失,免疫预防则是控制疾病的重要战略。但是在实际生产中,并不是所有疾病均有疫苗可用,也不是所有疫苗均可对机体产生完全免疫保护。特别是一些灭活苗和基因工程苗由于抗原性低等原因,免疫效果往往并不理想,时常造成免疫失败。鸡白细胞介素-2(ChickenInterleukin-2,ChIL-2)在家禽养殖业中可作为免疫佐剂,提高鸡体抵抗病原的免疫力,自1982年被发现以来一直是细胞因子研究中的（略..）热点之一,可望与疫苗配合使用,成为一种重要的细胞免疫佐剂,提高机体抗感染力,增强灭活苗或基因工程疫苗免疫效果。本文利用毕赤酵母(PichiaPastoris)表达重组ChIL-2并对其提高鸡免疫功能的生理活性作了研究。首先将ChIL-2克隆至毕赤酵母穿梭表达质粒pPIC9K构建重组质粒pPIC9K/ChIL-2,经SalI线性化酶切,电穿孔将其整合到毕赤酵母GS115(His+Mut+)染色体上,利用MM、MD平板筛选His+Mut+型阳性克隆,（此处忽略..）再用高浓度G418-YPD平板筛选高拷贝转化子。共筛选到了5株阳性克隆,用菌落PCR做进一步的筛选,得到3株高拷贝菌株。筛选到的高拷贝菌株进行BMGY/BMMY摇瓶培养,诱导表达重组ChIL-2。经SDS-PAGE与Westernblot分析,证实ChIL-2基因在重组GS115中成功表达出约16kDa与14kDa两条特异性条带,这与天然ChIL-2分子量大小一致,提示与天然蛋白一样,重组ChIL-2可能也为糖基化蛋白。将重组的酵母菌株进行发酵生产,其表（略..）达量较摇瓶培养提高了20倍左右,达到约100mg/L,重组目标蛋白质量分数达总蛋白的50%以上。由于目的蛋白与杂蛋白带大小相差甚大,通过膜过滤截留就得到了高纯度的目的蛋白,操作简单。本研究为工业化生产鸡白细胞介素-2奠定了基础。将纯化到的ChIL-2与疫苗一起联合免疫鸡群,研究其作为免疫增强剂对禽流感病毒(avianinfluenzavirus,AIV)疫苗和新城疫病毒(Newcastlediseasevirus,NDV)疫苗的免疫增强效果,用血凝抑（略..）制试验检测鸡体血清中的AI抗体和ND抗体水平。实验结果表明:ChIL-2与禽流感或新城疫疫苗同时使用对疫苗有良好的免疫增强作用,能有效提高鸡体抗体滴度,延长抗体滴度的时间,提高存活率。ChIL-2的使用剂量应该在8.35μg/鸡左右。在使用的过程中,ChIL-2没有发现任何毒副作用,证明是一种安全高效的免疫增强剂。

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