杭白菊提取液对小牛血管平滑肌细胞凋亡及抗氧化性的研究

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杭白菊提取液对小牛血管平滑肌细胞凋亡及抗氧化性的研究

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毕业论文范文题目：杭白菊提取液对小牛血管平滑肌细胞凋亡及抗氧化性的研究，论文范文关键词：杭白菊提取液对小牛血管平滑肌细胞凋亡及抗氧化性的研究
杭白菊提取液对小牛血管平滑肌细胞凋亡及抗氧化性的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：一、背景细胞凋亡是20世纪70年代提出的一个新的细胞死亡概念。是指在一定的生理或病理因素条件下，在基因活动的控制下，遵循自身程序的一种主动的细胞死亡过程。近几年的研究表明，细胞凋亡的异常不仅见于肿瘤等疾病，在心血管疾病中也起着重要作用，运用细胞凋亡现象来解释某些临床问题，已成为心血管疾病研究的新思路。动脉粥样硬化(AS)是心血管系统的常见病，是构成威胁人类健康的主要疾病之一。自从1995年Bennet等证实AS斑块中血管平滑肌细胞(VSMC)的死亡是以凋亡形式发生后，吸引了众多学者对这一方面进行了研究，他们发现：在AS中VSMC凋亡的发生率较正常明显增高，由于VSMC的大量凋亡，同时不能分泌足量的细胞外基质来维持组织结构，使斑块的稳定性降低；另外，凋亡的VSMC不但具有产生凝血酶的能力，还能够暴露（文章此处忽略..）AS斑块局部的阴性磷脂酰丝氨酸，诱发局部血栓形成，，导致AS斑块破裂、动脉瘤形成、急性心肌梗塞、肢体坏死和猝死等急性临浙江大学硕士学位论文床并发症的发生。因此，若有某种药物能阻断AS晚期VSMC的凋亡，可能会有助于防止AS并发症的发生。杭白菊是菊科多年生草本相物菊的花，含有多种药效成分，其中黄酮类化合物是其主要成份之一，而黄酮类化合物被认为是与人体密切相关的生理活性物质具有清除自由基作用。二、目的本实验通过观蔡杭白菊提取液是否抑制小牛VSMC凋亡及其对培养液中SOD、MDA含量的变化，进一步探讨杭白菊提取液在预防AS并发症方面的作用及其可能的作用机制。三、方法1、VSMC的培养：原代细胞培养采用组织贴块种植法，取新生小牛胸主动脉，剥净外膜、内膜，剪成约lmm‘的小组织块，接种（本文此处忽略..）于25ml的培养瓶内。加入含20％NCS的1640培养液，放入37oC。5％CO。孵箱，每隔3～sd换液一次，倒置显微镜下动态观察细胞生长情况。待细胞生长融合出现“峰与谷”结构后，用0．25％胰蛋白酶消化传代（按1；2进行）。在相差显微镜下细胞呈梭形或长梭形，重叠生长达多层，高低起伏呈“峰与谷”，无接触抑制现象。实验选用第4～5代细胞。2、分组：本实验分VSMC正常凋亡组和VSMC异常凋亡组。取长成致密单层的VSMC接种于6孔培养板中门～孔L37aC，5OCOZ培养24’h时后，VSMC正常凋亡组继续给以含20oNCS的培养液：VSMC异常凋亡组则更换成无血清培养液，目的是去除血清生长因子，建立VSMC异常凋亡模型。异常凋亡组又分成五组，无杭白菊组作为空白对照组，其它四组分别加入不同浓度的杭白菊提取液瞩0，100，200，400As／ml入以上每组（文章此处忽略..）均为4复孔。上述细胞继续培养48小时后收集培养液，离心10分钟3浙江大学硕士学位论文（2000r／mi），取上清液作为待测样品，余细胞即刻行凋亡细胞检测。3、SOD、MDA的检测：取上述细胞培养的上清液，在分光光度仪下行SOD、MDA测定。SOD检测采用邻苯三酚自氧化抑制法，在波长550urn处比色，以每ml培养液中SOD活力单位（U／ml）表示；MDA检测通过MDAW与硫代巴比妥酸结合，形成红色产物，在532urn处有最大吸收峰。为确定杭白菊本身对SOD、MDA的测量有无影响，同时取少量未加杭白菊组的上清液加入400。g；’L的杭白菊，进行SOD和＼IDA测定。4、流式细胞仪鉴别凋亡细胞：每孔加入0．sml含l．smNICacl。的DMENI液和sulAnnexinVFITC液，室温下孵育10分钟，弃去上清液，用上述D（本文此处忽略..）MEM液反复冲洗2次，加入极少量的0．25％胰蛋白酶，吹打获取细胞，用缓冲液将细胞稀释至10乙10‘尬l，加入＊液，在0”C孵育15分钟后即在流式细胞仪下进行分析四、实验结果1、不同浓度杭白菊提取液的SOD、MDA测量值显示杭白菊提取液本身对SOD、MDA测量值无影响。2、VSMC在不同杭白菊提取液浓度干预下SOD、MDA的影响：随着杭白菊提取液浓度的增加，nD值升高（＜刀．盯甜0，P＜0．叮），mA值降低什＝－0．u05P＜0．01）。3、凋亡模型：通过AnnexinVFITC及PI染色，流式细胞仪可检测出早期细胞

以上为本篇毕业论文范文杭白菊提取液对小牛血管平滑肌细胞凋亡及抗氧化性的研究的介绍部分。

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