玉米γ-生育酚甲基转移酶基因的分离及其功能分析

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玉米γ-生育酚甲基转移酶基因的分离及其功能分析

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毕业论文范文题目：玉米γ-生育酚甲基转移酶基因的分离及其功能分析，论文范文关键词：玉米γ-生育酚甲基转移酶基因的分离及其功能分析
玉米γ-生育酚甲基转移酶基因的分离及其功能分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：维生素E又称生育酚,仅由光合生物合成,可以清除生物体内的活性氧和自由基,是人体必需的一类脂溶性维生素,具有重要的抗氧化功能。每天食用一定量的维生素E可以起到增强机体免疫力、防衰老、防癌、防心脑血管疾病及预防或减慢某些慢性疾病的作用。在天然存在的8种生育酚中,α-生育酚的生物活性最高,且被人体优先吸收和利用,但人类维生素E的主要膳食来源-食用植物油中,α-生育酚水平普遍比较低,而其前体γ-生育酚的水平却比较高。γ－生育酚甲基转移酶(γ-TMT)是天然维生素E合成途径中的关键酶之一,其表达及活性对（文章此处忽略..）决定植物维生素E的组成起着重要作用,它催化6,γ-生育酚分别甲基化生成β,a-生育酚。玉米油是一种高品质的食用植物油,它含有86%的不饱和脂肪酸,其中56%是亚油酸,人体吸收率可达97%以上；玉米油中还含有少量的辅酶,也具有抗氧化性能；玉米油所含的谷固醇及磷脂,有防止衰老的功效,可降低人体内胆固醇的含量,增强人体肌肉、心脏和血管系统的机能,提高机体的抵抗能力。此外,本研究初期分别克隆了高油玉米115号、大豆(Glycinemax)、模式植物拟南芥(Arabidopsisthaliana)、结球甘蓝(Oryzasativa)的（此处忽略..）γ-TMT基因的全长cDNA序列,进行原核表达,结果显示玉米γ-TMT体外比活最高。鉴于上述背景,本研究旨在通过分离玉米γ-TMT基因,并对其进行功能分析,为研究γ-TMT基因在维生素E生物合成中的作用和以后通过基因工程方法提玉米油α-生育酚水平奠定基础,主要结果如下：1.提取玉米总RNA,利用RT-PCR技术,从高油玉米115号中分离了γ-TMT的全长cDNA序列(1059bp)。2.构建了γ-TMT基因的原核表达载体pET-sigMTMT,并将其转化大肠杆菌BL21,纯化得到原核表达的高活性γ-生育酚甲基转移（略..）酶。3.构建了植物表达载体pBI121-MTMT,粘花法转化拟南芥,抗性筛选转基因拟南芥,获得7个纯系。4.提取纯系转基因拟南芥的总蛋白,进行ELISA检测和Westernblotting分析。ELISA结果表明3#株系的γ-TMT活性最高,为野生拟南芥的4.56倍,6#为4.41倍;Westernblotting也得到深浅不一的目的条带,表明不同株系具有活性不同的γ-TMT。5.分别提取7个纯系的转基因拟南芥总RNA,通过Northernblotting分析表明,γ-TMT基因在转基因拟南芥中均有表达。6.用HPLC技术测（文章此处忽略..）定7个纯系的α-生育酚和γ-生育酚含量变化,转基因植株的α-生育酚与γ-生育酚比值都高于野生型,其中6#最高为7.67,是野生型的13.14倍。7.构建了玉米γ-TMT基因与GFP融合的植物表达载体pBI121-MTMT-GFP,通过叶盘转化法转化烟草,通过对转基因烟草的根部细胞观察发现12颗有GFP表达,并且在细胞核中表达最强,其次是细胞膜,但并不是在所有细胞的核中都表达。

以上为本篇毕业论文范文玉米γ-生育酚甲基转移酶基因的分离及其功能分析的介绍部分。

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