链霉素单克隆抗体的制备及其初步应用研究

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链霉素单克隆抗体的制备及其初步应用研究

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毕业论文范文题目：链霉素单克隆抗体的制备及其初步应用研究，论文范文关键词：链霉素单克隆抗体的制备及其初步应用研究
链霉素单克隆抗体的制备及其初步应用研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：链霉素(streptomycin，SM)作为一种重要的氨基糖苷类抗生素，具有性质稳定、抗菌谱广、生产工艺简单、疗效好(尤其具有特效的抗结核杆菌作用)等优点，被广泛应用于动物疾病的治疗和预防上，但链霉素具有严重的耳毒性和肾毒性，使其在动物性食品中的残留引起人们的高度关注。为了建立快速、高效、灵敏、特异的兽药残留检测方法，本研究制备了链霉素单克隆抗体，建立了间接竞争ELISA检测方法，为单抗试剂盒的研制打下基础。将链霉素与载体蛋白(BSA和OVA)，在pH9.6的碳酸盐缓冲液中缓慢搅拌（略..）反应12h，使链霉素的醛基与蛋白质的氨基直接缩合形成偶联物，将反应后的产物用pH7.40.01mol／L的PBS透析3天，利用麦芽酚显色反应和紫外扫描法对透析后的产物进行分析和鉴定，结果表明：链霉素与载体蛋白交联成功，SM-BSA的蛋白含量为1.651mg／mL，SM-OVA的蛋白含量为0.540mg／mL。将制备成功的人工抗原免疫BALB／C小鼠，以SM-OVA为包被原，用间接ELISA法，选出抗血清效价高且特异性强的BALB／C小鼠，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞在促融剂(50％PEG-1500)作用下进行细胞（略..）融合，采用间接ELISA法和间接竞争ELISA法，利用有限稀释法克隆技术，经过3次的克隆和筛选，最终筛选出3株能稳定分泌单抗的细胞株，并对3株细胞的培养上清液进行单抗亚型鉴定，皆为IgG2b型单抗。将其中一株杂交瘤3C_(12)注入小鼠腹腔，制备腹水，对腹水采用辛酸—硫酸铵法纯化，纯化后测腹水的蛋白含量为1.451mg／mL，效价为1∶51200。利用SDS—PAGE进行纯度鉴定，结果表明：电泳染色后呈现一条重链，一条为轻链，纯度较高。初步应用纯化后的单抗，建立间接竞争ELISA法，采用方正滴定法确定最（略..）佳包被原浓度为5μg／mL，单抗的工作浓度为1∶8000，并对其反应条件进行优化。对优化建立后的间接竞争ELISA法进行分析，得到标准曲线方程为y=81.00—20.41x，其相关系数为0.9726，IC_(50)为33.03ng／mL，最低检测限为1.0ng／mL，在1～10000ng／mL之间线性关系良好。通过交叉实验，表明链霉素与双氢链霉素交叉率达127％，与庆大霉素、卡那霉素、新霉素无交叉反应。表明建立的间接竞争ELISA法对硫酸链霉素和双氢链霉素具有较好的选择性。将链霉素系列药物浓度添加到牛奶和鸡肉中，分别以牛奶和鸡肉作为基质作标（文章此处忽略..）准曲线方程，再分别取高、中、低3个链霉素药物浓度作回收实验，采取与标准曲线相同的样品处理过程，得到链霉素在牛奶中的回收率在68.8％～78.1％之间，鸡肉中的回收率在54.7％～61.2％之间，结果表明：应用链霉素单抗建立的间接竞争ELISA方法能用于检测鸡肉与牛奶中链霉素的残留。

以上为本篇毕业论文范文链霉素单克隆抗体的制备及其初步应用研究的介绍部分。

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