基于蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）跟α-葡萄糖苷酶（GAA）的降糖

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基于蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）跟α-葡萄糖苷酶（GAA）的降糖

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毕业论文范文题目：基于蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）跟α-葡萄糖苷酶（GAA）的降糖，论文范文关键词：基于蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）跟α-葡萄糖苷酶（GAA）的降糖
基于蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）跟α-葡萄糖苷酶（GAA）的降糖毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：[背景及目标]糖尿病是一种常见的代谢性疾病,它是因为胰岛素绝对或绝对分泌不足所造成的,病理表示为身材内的糖、蛋白质、脂肪跟电解质代谢混乱。它可能波及全身各个体系,甚至诱发很多致命性并发症,重大影响跟迫害人类健康。近年来,跟着世界各国社会经济的发展、居民生活程度的进步跟生活模式的改变,糖尿病的发病率及患病率逐年升高。在中国已确诊的糖尿病患者达4000万,已成为一种常见病、多发病。糖尿病重要有两品种型:1型糖尿病(type1diabetes),多与遗传背景相干。重要产生于青少年,其胰岛素分泌缺乏,必须打针医治,但5年内个别不并发症的产生。2型糖尿病(type2diabetes)是因为遗传与环境因素的独特作用造成的,其占糖尿病总数的90%以上。多见于中、老年人,其胰岛素的分泌量并不低甚至还偏高,病因重要是机体对胰岛素不敏感。2型糖尿病很轻易引起慢性并发症如糖尿病肾病、视网膜病变、神经病变等,这些都导致了糖尿病患者的高致残率跟致逝世率。近年来的研究发明,这些慢性并发症的产生重要是与代谢中的一系列酶类异样调控有关。因此研究这些酶类的克制剂或者有助于减少并发症的产生,降落并发症的迫害,从而达到医治糖尿病的目标。其中研究最多的酶类有:α-葡萄（本文此处忽略..）糖苷酶(α-glucosidase,GAA)、醛糖还原酶(aldosereductase,AR)、二肽基肽(dipeptidylpeptidase,DPP),蛋白酪氨酸磷酸酶(Protein-TyrosinePhosphatase,PTP)等。蛋白酪氨酸磷酸酶家族通过特异性地去除蛋白质中酪氨酸残基上的磷酸基团,来改变酪氨酸的磷酸化状况,从而行使对多种细胞功能的重要调节作用。其中蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)是胰岛素信号转导道路的负调控因子,可能降落胰岛素受体本身磷酸化程度,从而降落身材对胰岛素的敏感性。在PTP1B基因敲除的小鼠骨骼肌跟肝脏中,其缺失可使胰岛素受体本身磷酸化程度进步,增加细胞或组织对胰岛素的敏感性。PTP1B负调控瘦素信号通路,表白增加跟异样激活可引起信号传递混乱。它在肝脏的适量表白可使超低密度脂蛋白(verylow-densitylipoprotein,VLDL)适量产生,引起脂代谢混乱。糖、脂的代谢混乱会进一步促进或加重了糖尿病慢性并发症的产生、发展。因此研究PTP1B的特异性克制剂有望为医治糖尿病的医治提供新的帮助。然而,目前PTP1B的克制剂品种跟数量都较少,实验中常用的是对-硝基苯磷酸二钠(PNPP)。P（略..）NPP是人工化学合成的产品,在实际中发明存在价格昂扬、对身材有必定毒副作用等问题,不是医治糖尿病的最佳抉择。为此须要从一些传统医治糖尿病的药物跟可食用动物中获取天然组分,从中筛选对PTP1B存在较强克制造用的组分。这些组分纯天然,无毒副作用,对其深刻研究有望为糖尿病的新药开发提供基本。维吾尔医药历史长久,在其构成跟发展过程中,采阿拉伯、中医药学之所长,是我公民族医药的独破分支,对人们的健康生活做出了重要奉献。据考察新疆全区有维药600余种,较常用的360种左右,重要有:巴旦杏、鹰嘴豆、雪莲花、沙生蜡菊等。在糖尿病的医治过程中,传统维药中的一些药材存在很好的作用。近年来对这些药材进行深刻研究,发明了多种医治糖尿病及并发症的有效组分。所获得的成果为医治糖尿病药物的开发,以及维吾尔医药的古代化发展提供了科学根据。[方法]利用分别纯化技巧,从对糖尿病及其并发症有医治作用的维药药材中提取有效组分。样品经冷冻干燥后,根据其极性的不同,用二甲基亚砜(DMSO)或蒸馏水配制成溶液备用。利用PCR技巧,从真核表白载体pJ3H-PTP1B中扩增出蛋白酪氨酸磷酸酶1B的功能区域(PTP1B1-321)的编码序列,构建到原核表白载体pET-30a(+),pET-30a（略..）-PTP1B1-321通过DNA测序跟双酶切鉴定。把重组质粒转入BL21(DE3)菌种中,引诱表白跟纯化,得到目标蛋白,通过SDS-PAGE鉴定其大小。利用纯化的蛋白进行酶促能源学实验。从各种提取组分中,筛选对PTP1B克制后果较好的组分,并测定其半克制率(IC50)跟克制类型。把筛选出的组分参加畸形培养的CHO细胞中,利用Westernblot方法测定细胞中胰岛素信号通路下游因子AKT的磷酸化程度,利用氧化酶法测定细胞培养液中葡萄糖的含量。利用RT-PCR技巧,克隆白色念珠菌的α-葡萄糖苷酶基因,构建到原核表白载体pET-30a-PTP1B1-321。通过DNA测序跟双酶切鉴定。把重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)菌种中,引诱表白跟纯化,得到目标蛋白,通过SDS-PAGE鉴定其大小,测定α-葡萄糖苷酶的最适pH值跟作用底物。[成果](1)通过PCR获得了蛋白酪氨酸磷酸酶1B的功能区域PTP1B1-321,构建到原核表白载体上,经IPTG引诱表白,SDS-PAGE检测表白蛋白绝对分子品质约为40.8kDa。(2)通过酶促能源学实验,共检测了84份提取物。在500μg/mL的浓度下,筛选出了29个对PTP1B的克制率在80%以上的组分。测定了14个组分的IC50值,以及6个组分的克制类型。(3)玫瑰花提取物明显加（此处忽略..）强AKT磷酸化,且AKT磷酸化程度跟着PRRE浓度的增加而回升;培养液中葡萄糖的含量随PRRE浓度的增加而降落。(4)克隆了α-葡萄糖苷酶基因,构建到表白载体上,经IPTG引诱表白,SDS-PAGE检测表白蛋白绝对分子品质约为41kDa。经Ni2+亲跟柱纯化的重组α-葡萄糖苷酶最适pH值为6.0,最适作用底物为hydrolyzeρ-nitrophenylglucoside(pNPG),其次为可溶性淀粉跟蔗糖。[论断]成功树破了靶向PTP1B跟GAA的抗糖尿病筛选平台,并对维药提取物进行筛查,得到29个高活性的组分;初步阐明了PRRE抗糖尿病的分子机制:通过克制PTP1B活性,上调胰岛素信号通路的下游因子AKT的激活,促进葡萄糖的转运,从而达到降糖的目标;本平台的树破为深刻研究维药抗糖尿病的物质基本及分子机制提供技巧支撑,并将有利于促进维药古代化。

以上为本篇毕业论文范文基于蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）跟α-葡萄糖苷酶（GAA）的降糖的介绍部分。

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