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VEGF在神经病理性疼痛大鼠脊髓的表达及其对伤害性刺激反应的易化作用

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毕业论文范文题目:VEGF在神经病理性疼痛大鼠脊髓的表达及其对伤害性刺激反应的易化作用,论文范文关键词:VEGF在神经病理性疼痛大鼠脊髓的表达及其对伤害性刺激反应的易化作用
VEGF在神经病理性疼痛大鼠脊髓的表达及其对伤害性刺激反应的易化作用毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:目的1.观察大鼠坐骨神经慢性结扎损伤模型(chronicconstrictionofsciaticnerve,CCI)对伤害性热板刺激和机械压力刺激的缩爪反应;2.探讨VEGF及其Flk-1受体在大鼠神经病理性疼痛中的作用。3.了解VEGF蛋白在CCI大鼠脊髓表达的时间依赖性变化。方法1.建立CCI大鼠模型。根据Benntt和Xie在1988年创建的模型,即在无菌条件下分离大鼠股二头肌,暴露左侧坐骨神经主干8-10mm,然后用4-0铬制肠线每间隔1.0-1.5mm疏松结扎坐骨神经1次,共结扎4次,结扎强度以引起大鼠小腿肌肉轻度颤动和不影响神经外膜的血运为度。结扎神经后仔细止血并逐层缝合。假手术组按照同样方法暴露坐骨神经,但不结扎坐骨神经。2.行为学测试。手术后第7天用智能热板仪(RB-200,温度维持在52℃)和电子压痛仪(YT-100)测量大鼠后爪足底对热和机械刺激的缩爪反应潜伏期(HWLs),以评价该大鼠慢性神经病理痛模型是否成功。将行为学方法测试HWLs确定成功的模型大鼠,纳入实验。实验时,在给药前先测试大鼠双侧HWLs3次,取其平均值作为前对照即给药前值,再分别测试给药后5、10、15、20、30、45、60min的HWLs。将给药后不同时间的HWLs换算成变化百分比,即:(给药后值—给药前值)/给药前值×100%。3.采用免疫组织化学方法染色及图像处理软件检测假手术组和CCI组手术后1d、3d、5d、7d、14d和28d六个时间段大鼠L4-5脊髓组织VEGF蛋白的表达。结果1.正常大鼠与CCI大鼠的HWLs的比较正常对照组大鼠左、右两侧后爪足底对热板刺激的HWL均值分别为4.52±0.19和4.54±0.18;其对机械压力刺激的HWL均值分别为5.12±0.39和5.16±0.40。比较该组大鼠左、右两侧后爪足(略..)底对热板刺激和机械压力刺激的HWLs,经统计学处理无显著性差异。CCI大鼠组左、右侧后爪足底对热板刺激的HWL均值分别是2.86±0.12和3.63±0.16,对机械压力刺激的HWL均值分别是2.65±0.83和3.78±0.24。与正常对照组比较,CCI大鼠组左、右侧后爪对热板刺激和机械压力刺激的HWLs差异具有非常显著的统计学意义(P0.01)。实验结果提示CCI大鼠组对伤害性刺激反应的敏感性增加。2.鞘内注射VEGF缩短CCI组大鼠双侧后爪足底对伤害性刺激的HWLs35只CCI大鼠随机分成4组:一组为对照组,三组为VEGF组。对照组(n=9):鞘内注射10μl生理盐水;VEGF组又分为:实验A组(n=8):鞘内注射0.1nmolVEGF;实验B组(n=9):鞘内注射0.2nmolVEGF;实验C组(n=9):鞘内注射0.4nmolVEGF。(1)鞘内注射VEGF缩短CCI大鼠后爪足底对机械压力刺激反应的HWL对照组大鼠左、右侧后爪对机械压力刺激反应的HWL分别为:F_(left/left)=0.57,F_(right/right)=0.56。实验组鞘内注射0.1nmolVEGF大鼠左、右侧后爪对机械压力刺激反应的HWL分别为:F_(left/left)=0.52和F_(right/right)=0.30,与对照组比较,无显著性差异(P0.05)。鞘内注射0.2nomlVEGF大鼠左、右侧后爪足底对机械压力刺激反应的HWL分别为:F_(left/left)=15.40和F_(right/right)=15.01;鞘内注射0.4nmolVEGF大鼠左、右侧后爪足底对机械压力刺激反应的HWL分别为:F_(left/left)=19.03和F_(right/right)=18.60。分别与对照组比较,鞘内注射VEGF(0.2和0.4nmol)大鼠后爪足底对机械压力刺激(本文此处忽略..)的HWL明显缩短,经统计学处理具有非常显著性差异(P0.01)。提示VEGF在脊髓水平能够提高CCI大鼠两侧后爪足底对机械压力刺激反应的敏感性。(2)鞘内注射VEGF缩短CCI大鼠双侧后爪对热板刺激的HWL对照组大鼠左、右侧后爪足底对热板刺激反应的HWL分别为:F_(left/left)=0.61和F_(right/right)=0.63。鞘内注射0.1nmolVEGF大鼠左、右侧后爪足底对热板刺激反应的HWL分别为:F_(left/left)=46.82和F_(right/right)=41.22;鞘内注射0.2nmolVEGF大鼠左、右侧后爪足底对热板刺激反应的HWL分别为:F_(left/left)=98.43和F_(right/right)=92.32;鞘内注射0.4nmolVEGF大鼠左、右侧后爪足底对热板刺激反应的HWL分别为:F_(left/left)=125.22和F_(right/right)=118.56。与对照组比较,鞘内注射0.1nmol、0.2nmol、0.4nmolVEGF大鼠左、右两侧后爪足底对热板刺激反应的HWL在统计学上具有非常显著性差异(P0.01)。3.鞘内注射SU1498可逆转VEGF对大鼠HWLs的作用CCI大鼠鞘内注射0.4nmolVEGF10min后,再鞘内注射0.4nmolSU1498,大鼠左、右两侧后爪足底对热板刺激反应的HWL分别由F_(left/left)=124.35和F_(right/right)=120.42降低到F_(left/left)=45.68和F_(right/right)=43.83,在统计学上具有非常显著性差异(P0.01);CCI大鼠鞘内注射0.4nmolVEGF10min后,再鞘内注射0.4nmolSU1498,大鼠左、右两侧后爪足底对机械压力刺激的HWL分别由F_(left/left)=20.35和F_(right/righ(此处忽略..)t)=19.87降低到F_(left/left)=7.62和F_(right/right)=6.85,在统计学上具有非常显著性差异(P0.01)。以上可见VEGF易化大鼠后爪足底对伤害性刺激反应的结果可能被SU1498所阻断,提示VEGFR2介导由VEGF引起的大鼠后爪足底对伤害性刺激的易化效应。4.CCI大鼠L4-5脊髓VEGF蛋白表达的变化假手术组脊髓内血管、神经细胞、胶质细胞的VEGF表达极少;在CCI后第1d、3d、5d、7d、14d和28d时脊髓组织的神经元细胞核和胞浆内均出现较强的VEGF蛋白表达,第3d时表达量达高峰为20.80±6.06个,与对照组0.60±0.89个比较,存在显著性差异;CCI后第14d、28d时VEGF只出现在细胞浆内,其阳性神经元数量为7.80±2.17个和2.60±1.82个,较CCI第7d时明显下降,但仍较对照组显著升高。在CCI后第3d时L4-5脊髓组织的神经胶质细胞开始出现VEGF的表达,阳性神经胶质细胞的数量为13.25±3.16个;14d时达高峰,为35.83±6.11个;28d时阳性神经胶质细胞的数目较前减少,为21.50±4.93个;CCI各组VEGF阳性细胞数均较对照组差异非常显著(P0.01)。本实验中VEGF在脊髓血管内皮细胞上表达的变化是,在CCI后第1d时L4-5脊髓血管内皮细胞VEGF表达呈强阳性,在随后的第3d、5d、7d、14d时仍有表达,而在第28d时未见表达。本实验研究结果表明,VEGF蛋白在CCI大鼠不同时间段的神经元、神经胶质细胞和血管内皮细胞高表达,可能参与脊髓伤害性感觉信息传递或调制过程,其作用的分子机制有待于深入研究。本实验结果证明,外源性VEGF在脊髓水平易化慢性神经病理性疼痛大鼠后爪对伤害性刺激的反应,Flk-1受体介导该反应过程。该实验为了解神经病理性疼痛的分子机制(本文此处忽略..)补充了新内容。结论1.CCI组大鼠对伤害性热或机械压力刺激的HWLs明显低于正常对照组大鼠。2.CCI大鼠,鞘内注射VEGF组对伤害性热或机械压力刺激的HWLs明显短于鞘内注射生理盐水组,其缩短程度与VEGF呈量效关系。3.VEGFR2/Flk-1阻断剂SU1498能够阻断鞘内注射VEGF所致的CCI大鼠对伤害性热或机械压力刺激HWLs的缩短。4.CCI大鼠L4-5脊髓血管内皮细胞、神经细胞、胶质细胞表达VEGF蛋白呈时间依赖性的变化。


以上为本篇毕业论文范文VEGF在神经病理性疼痛大鼠脊髓的表达及其对伤害性刺激反应的易化作用的介绍部分。
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