胚胎大鼠背根神经节体外培养的实验研究

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胚胎大鼠背根神经节体外培养的实验研究

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毕业论文范文题目：胚胎大鼠背根神经节体外培养的实验研究，论文范文关键词：胚胎大鼠背根神经节体外培养的实验研究
胚胎大鼠背根神经节体外培养的实验研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的：目前神经组织培养技术是神经科学一项很有价值研究手段和方法。背根神经节（dorsalrootganglionsDRGs）是周围神经系统(peripheralnervesystem,PNS)的感觉神经元,DRGs的体外培养模型已广泛用于轴突的导向及再生、突触发育和可塑性、中枢神经系统和周围神经系统的髓鞘形成，神经营养因子作用及受体分布、神经细胞衰老机制、基因治疗、组织工程等神经科学的研究，成为遗传性、获得性神经病的一个新的研究途径。格林-巴利综合征（Guillain-BarresyndromeGBS）是包括许多临床亚型的周围神经系统疾病。目前认为是体液免疫和细胞免疫共同介导的神经系统自身免疫性疾病，但病因及发病机制并（此处忽略..）不十分明确。本实验建立DRGs体外培养模型为进一步研究格林-巴利综合征提供一个崭新的研究工具。本课题建立了体外胚胎大鼠背根神经节的分离培养及纯化体系，在光镜水平从细胞形态学角度观察了培养神经元细胞的生物学特性。方法：(1)采取神经组织单层原代分离培养的方法建立DRGs的混合培养体系:无菌取孕15天（E15）Sprague-Dawley（SD）大鼠胚胎的DRGs，用胰蛋白酶消化20分钟，再用机械吹打法将DRGs制成单细胞悬液，以106细胞密度种植在预先包被细胞基质成分多聚赖氨酸(poly-L-lysin,PLL)和层粘蛋白（Laminin，LN）的培养板中，加入含胶质细胞源性神经营养因子（glialcelllineWP=4derivedneuro（此处忽略..）trophicfactor,GDNF）的NB1培养基，于CO2培养箱中培养。(2)利用差速贴壁法建立DRGs的分离纯化体系:将胰蛋白酶消化后的单细胞悬液首先种植在未包被基质的35mm的培养皿中，于CO2培养箱中孵育50分钟，收集未贴壁的细胞悬液以106细胞密度种植在预先包被PLL和LN的培养板中，在NB1培养基中培养。(3)于培养的不同时间在倒置相差显微镜下观察神经元的存活、胞体变化及轴突生长情况。用尼氏染色观察培养神经元的尼氏体分布。并通过神经元特异性的烯醇化酶（neuronalspecificenolaseNSE）进行免疫组织化学染色以鉴定培养的神经元，并计数混合培养和纯化培养体系中NSE样阳性神经元所占的比率以鉴定培养体系的纯度。结果：背根神（本文此处忽略..）经节神经元（dorsalrootganglionneuron,DRGn）在体外合适的培养条件下可以存活，培养12-18小时神经元已贴壁，并长出突起，随着培养时间的延长，突起增多，伸长，细胞之间形成浓密的神经元网络。培养过程中神经元胞体大小变化不大，形状从刚接种时的球形演变为椭圆形、三角形和多角形等。培养中的神经元有一个逐渐成熟的过程，表现为核质比不断增加，培养不同时期都伴随着部分神经元的死亡。混合培养体系是神经元、雪旺细胞、成纤维细胞的杂合而成，可存活3-4周。纯化培养体系存活的主要是神经元,可维持2周。对培养的神经元进行尼氏染色可见颗粒状或块状尼氏体分布在神经元胞浆中，表明培养的神经元生活状态良好。用NSE抗体对混合和纯化两种（本文此处忽略..）培养体系进行免疫组化鉴定，可见到NSE阳性反应的神经元，并测算其纯度分别为32.12±3.2%;91.23±2.9%,WP=5两者具有显著的统计学差异,表明通过差速贴壁法纯化培养可获得高纯度的神经元。结论：本研究模拟神经元体内的生理环境，采用神经组织原代分离培养方法建立胚胎大鼠DRGn的分离培养体系，通过差速贴壁法可得到高纯度DRGn纯化培养体系。培养和纯化的DRGn体外可存活较长时间，并长出突起，形成密集的神经元网络。体外培养条件下的神经元结构类似于体内的DRGn，可作为神经发育学、神经生物学和临床神经病学等研究的重要模型。

以上为本篇毕业论文范文胚胎大鼠背根神经节体外培养的实验研究的介绍部分。

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