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贻贝酶解多肽制备工艺及抗前列腺癌活性研究

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毕业论文范文题目:贻贝酶解多肽制备工艺及抗前列腺癌活性研究,论文范文关键词:贻贝酶解多肽制备工艺及抗前列腺癌活性研究
贻贝酶解多肽制备工艺及抗前列腺癌活性研究毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:本文以贻贝为原料,利用酶解技巧、超滤法、凝胶层析技巧、离子交换层析技巧跟反相高效液相色谱技巧等多种分别纯化手段,研究了贻贝蛋白的酶解工艺,抗肿瘤生物活性肽的制备工艺及活性肽的体外抗前列腺癌的活性功能及分子机制。在酶解工艺优化研究中,采取正交实验方法,重要研究了料液比、PH值、酶解温度、酶解时光跟加酶量对贻贝的酶解后果跟酶解物抗肿瘤活性的影响,实验成果如下:实验选用了碱性蛋白酶(Alcalase)、胰蛋白酶(Trypsin)跟胃蛋白酶(Pepsin)共3种蛋白酶,当以酶解物的水解度为评估指标时,所得到的各蛋白酶的最佳水解前提为:Alcalase:料液比为1:4、pH值为10、加酶量为2000U/g、温度为50℃(文章此处忽略..)、水解时光为8h;Trypsin:料液比为1:4、pH值为8.5、加酶量为1000U/g、温度为45℃、水解时光为8h;Pepsin:料液比为1:5、pH值为5、加酶量为1500U/g、温度为45℃、水解时光为8h;而当以酶解物的抗肿瘤活性为评估指标所得到的各蛋白酶的最佳水解前提为:Alcalase:料液比为1:4、pH值为10、加酶量为1500U/g、温度为50℃、水解时光为8h;Trypsin:料液比为1:4、pH值为8、加酶量为1500U/g、温度为40℃、水解时光为2h;Pepsin:料液比为1:4、pH值为5、加酶量为1500U/g、温度为55℃、水解时光为8h。当以3种蛋白酶抗肿瘤活性指标得到的最佳水解前提对贻贝蛋白进行水解,所得到的水解物中以Trypsin水解物的水解(本文此处忽略..)度最高,而以Alcalase水解物的抗肿瘤活性最强。在活性肽制备工艺中,首先选用的是超滤法,通过用截取分子量为10KDa、5KDa跟3KDa的超滤膜进行超滤后,共得到4个组分即MH1(10KDa)、MH2(5-10KDa)、MH3(3-5KDa)跟MH4(3KDa),其中以分子量最小的MH4抗肿瘤活性最强,在浓度为0.5mg/mL、作用48h后,对DU-145跟PC-3细胞的增殖克制率分辨为33.17%跟30.24%。将MH4经DEAE-SepharoseFF离子交换层析后,又得到了4个组分,即MH4-1、MH4-2、MH4-3跟MH4-4,这4个组分均存在抗肿瘤活性,但以MH4-2活性最强,将其经SephadexG-25凝胶层析后,得到了3个组分,即MH4-2-1、MH4-2-2跟MH4-2-3,以MH4-2-1抗(本文此处忽略..)肿瘤活性最强。将该组分经反相高效液相柱ZorbaxSBC18纯化后,终极得到了纯度较高的活性肽APMH,该肽分子量为391.2Da,对DU-145跟PC-3细胞均有很好的增殖克制活性,并且浮现浓度跟时光依附性,同时对DU-145细胞的克制活性优于PC-3。HE染色成果表明,APMH作用后,DU-145跟PC-3细胞中均呈现细胞空泡跟胞核稀释等典范的细胞凋亡特点;AnnexinV-FITC/PI流式细胞术双染色分析成果显示,APMH作用24h后,DU-145跟PC-3细胞均呈现凋亡情况,并且跟着浓度的增加,细胞凋亡率跟细胞坏逝世率均增加;免疫组化成果表明,APMH对DU-145跟PC-3作用48h后,凋亡负调控因子Bcl-2的表白量急剧降(略..)落,而凋亡引诱道路中的重要蛋白酶Caspase-3跟Caspase-9的表白量大量增加。据此可知,APMH抗肿瘤的作用机制之一是引诱细胞凋亡,而引诱凋亡的分子机制是下调Bcl-2及上调Caspase-3跟Caspase-9的表白。


以上为本篇毕业论文范文贻贝酶解多肽制备工艺及抗前列腺癌活性研究的介绍部分。
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