肿瘤坏逝世因子-α对肠上皮细胞通透性的影响及机制研究

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肿瘤坏逝世因子-α对肠上皮细胞通透性的影响及机制研究

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毕业论文范文题目：肿瘤坏逝世因子-α对肠上皮细胞通透性的影响及机制研究，论文范文关键词：肿瘤坏逝世因子-α对肠上皮细胞通透性的影响及机制研究
肿瘤坏逝世因子-α对肠上皮细胞通透性的影响及机制研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景与目标肠黏膜屏障是机体最重要的免疫防备屏障之一,它将机体与肠道内的外源性物质隔分开来,避免病原微生物侵袭跟抗原分子的伤害。肠黏膜屏障包含肠上皮细胞屏障、免疫屏障跟微生物屏障,而肠上皮细胞屏障是其最重要的一道屏障,是肠黏膜屏障存在抉择性通透的基本。目前研究发明肠上皮细胞屏障通透性增高参加多种疾病的产生(如炎症性肠病、败血症、烧伤等),并且在这些情况下,血清肿瘤坏逝世因子-α(TNF-α)明显升高,与肠上皮细胞屏障的侵害程度呈正相干,抗TNF-α抗体可能恢复受损的肠上皮细胞屏障。因此认为TNF-α是增加肠上皮细胞屏障通透性的重要因素。固然目前已经构成共鸣TNF-α可能增加肠上皮细胞屏障的通透性,但其具体作用机制跟方法还存在争议。早期认为与TNF-α引起的细胞凋亡密切相干,近年来则偏向于TNF-α引起肠上皮细胞屏障伤害是凋亡非依附性的。另外TNF-α引起肠上皮细胞屏障通透性增高的具体调控环节也不非常明白,它可能与蛋白激酶C(PKC)、核因子一κB(NF-κB).肌球蛋白轻链激酶(MLC（此处忽略..）K)、丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)等信号道路有关。因此本研究利用Caco-2细胞株树破体外肠上皮细胞屏障模型,察看TNF-α对其通透性的影响,并探讨TNF-α导致肠上皮细胞屏障通透增加的可能机制。研究方法1体外肠上皮细胞屏障模型的树破利用Caco-2细胞株树破体外肠上皮细胞屏障模型,利用跨上皮细胞电阻(transepithelialelectricalresistance,TEER)指标检测肠上皮细胞屏障的构成情况。2质粒转染及分组待Caco-2细胞成周到单层后无血清培养24h,依占领无转染NF-KB克制质粒(Mu-IκB)将其分为Mu-IκB质粒转染组(M-TNF-α组)跟Mu-IκB质粒未转染组(TNF-α组)。进一步根据TNF-α组预处理时光,两组分辨分为M-TNF-α0、3、6、12、24h；TNF-α0、3、6、12、24h5个亚组,各亚组于其相应的时光点在Transwell基底侧参加100μg/LTNF-α分辨孵育0、3、6、12、24h,其中Oh亚组未予TNF-α刺激。3TNF-α对肠上皮细胞屏障通透性的影响参加100μg/LTNF-α作用不同（此处忽略..）时光(0、3、6、12、24h),察看各组Caco-2细胞屏障TEER的改变。4TNF-α对肠上皮细胞NF-κB活性的影响参加100μg/LTNF-α作用不同时光(0、3、6、12、24h),采取荧光素酶报告基因检测Caco-2细胞NF-κB活性。5TNF-α对肠上皮细胞肌球蛋白轻链(myosinlightchain,MLC)磷酸化的影响参加100μg/LTNF-α作用不同时光(0、3、6、12、24h),采取蛋白质印迹法(westernblot)检测MLC磷酸化蛋白的表白程度6TNF-α对肠上皮细胞F-actin的影响参加100μg/LTNF-α作用不同时光(0、3、6、12、24h),罗丹明-鬼笔环肽直接染色免疫荧光显微镜下察看Caco-2细胞间F-actin改变。研究成果1TNF-α致肠上皮细胞的通透性变更TNF-α引起Caco-2细胞TEER降落,并存在时光依附性。TNF-α作用3h后,TEER值降落,与TNF-α0h组比较差别有明显性降落(P0.05),TNF-α作用24h,TEER降至最低,是TNF-α0h组的68.7%。克制NF-κB的活性(转染Mu-IκB质粒)后,TNF-α引起Caco-2细胞TE（文章此处忽略..）ER降落,M-TNF-α各亚组与TNF-α相应各亚组比拟,其TEER降幅均有明显减少(P0.05)。2TNF-α致肠上皮细胞NF-κB的活性变更TNF-α3h、6h、12h组NF-κB活性增高,与TNF-α0h组比较有明显性差别(均P0.05),其中TNF-α12h亚组NF-κB活性最高,与TNF-α0h、3h、6h、24h亚组比较有明显性差别(均P0.05)。转染Mu-IκB质粒后TNF-α作用3h时NF-κB活性开端增高,与M-TNF-α0h组比较有明显性差别(P0.05),随作用时光延长,NF-κB活性进一步增高,12h达到最高,随后NF-κB活性降落。M-TNF-α各亚组与TNF-α相应各亚组比拟,其NF-κB活性增高幅度均有明显性降落(P0.05)。3TNF-α致肠上皮细胞MLC磷酸化程度变更与TNF-αOh组比较,TNF-α作用6h,MLC磷酸化程度增加,转入Mu=IκB质粒后,TNF-α作用6h,MLC磷酸化程度无明显改变,作用12h才呈现MLC磷酸化增加。显示降落NF-κB活性后TNF-α引起MLC磷酸化作用延迟。4TNF-α致肠上皮细胞间F-ac（略..）tin变更畸形CaCo-2细胞,周到连接构造完全,呈致密的带状构造。参加100μg/LTNF-α作用12h细胞外周致密带边沿变得毛糙不规整,细胞荧光染色减弱,作用24h细胞外周轮廓含混难辨,逐步呈现锯齿样断裂,趋于变细崩解消散。转染Mu-IκB质粒后,M-TNF-α3、6、12h组Caco-2细胞的F-actin无明显改变,M-TNF-α24h组细胞外周致密带边沿开端变得毛糙不规整,细胞荧光染色减弱。研究论断肠上皮细胞MLC磷酸化及F-actin重组是TNF-α致其通透性增高的机制之一,此过程可能受NF-κB的调控。

以上为本篇毕业论文范文肿瘤坏逝世因子-α对肠上皮细胞通透性的影响及机制研究的介绍部分。

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