噬菌体展示EpCAM单链抗体的制备及其靶向肺腺癌细胞的初步研究

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噬菌体展示EpCAM单链抗体的制备及其靶向肺腺癌细胞的初步研究

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毕业论文范文题目：噬菌体展示EpCAM单链抗体的制备及其靶向肺腺癌细胞的初步研究，论文范文关键词：噬菌体展示EpCAM单链抗体的制备及其靶向肺腺癌细胞的初步研究
噬菌体展示EpCAM单链抗体的制备及其靶向肺腺癌细胞的初步研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：肺癌是一种在全世界范畴内重大迫害人类健康与生命的疾病,其起病隐袭,生存率低,发病率跟逝世亡率高。肺癌按病理类型分为小细胞肺癌跟非小细胞肺癌,其中非小细胞肺癌比例高达80%-85%,而非小细胞肺癌中腺癌占60%-80%。肺癌总的5年生存率至今仍在10%或略高。只管医务工作者们多年来始终在不知疲倦地致力于寻求可能改良肺癌预后的方法,但我国肺癌的发病率跟逝世亡率仍逐年攀升。寻找有效的道路,对其进行早期诊断从而改良预后,是目前医务工作者们关注跟研究的热点之一。从阐明肿瘤的来源着手寻找包含肺癌在内的恶性肿瘤的早诊方法,可能是一个值得尽力的方向。肿瘤的发病机制有多种学说,目前研究得较多且较公认的是“肿瘤干细胞学说”。干细胞实际认为,肿瘤可能是一种干细胞疾病。肿瘤干细胞是存在于肿瘤中的一小部分存在干细胞性质的细胞群体,（略..）存在自我更新跟无穷增殖才能,可能产生与上一代完全雷同的子代细胞,并且存在多种分化潜能,产生不同表型的肿瘤细胞,从而造成肿瘤细胞的群体漂移,构成肿瘤的异质性,并使肿瘤在体内始终扩大,或构成新的肿瘤病灶。因此,肿瘤的产生,及其侵袭转移、复发、耐药、抗辐射等恶性表型特点都与肿瘤干细胞有关。如能在肿瘤产生的始动阶段找到若干肿瘤干细胞的名义标记物,则将大大推动肿瘤的早期诊断,进而改良其预后。目前常用的肿瘤名义标记物如CEA、CA-199、NSE等固然对肺癌的诊断有必定帮助,但缺乏特异性。研究表明,上皮细胞粘附分子(EpCAM),又名ESA或CD326,是一个常见的高表白性上皮肿瘤相干抗原,在人类大多数上皮组织肿瘤中的表白强度远远超过畸形组织,可作为上皮来源肿瘤的诊断跟预后监测的特异性标记,且已被用于（本文此处忽略..）多种肿瘤研发基于EpCAM相干的抗体或疫苗的临床实验中。近年来的研究表明:EpCAM是多种上皮肿瘤干细胞的分子标记物,被认定可作为肿瘤来源干细胞的一种标记,使其成为诊断跟医治上皮来源肿瘤的更有意思的靶标。如,Eramo等利用人类肺癌干细胞中的EpCAM高表白,结合CD133作为分子表型(EpCAM+CD133+)对肺癌干细胞进行分选,通过各种方法证明分选出的细胞存在自我更新、无穷增殖等干细胞样细胞的特点。因此如能制备出EpCAM特异性抗体,对靶向鉴定肺癌干细胞,继而终极实现肺癌早诊将存在重要意思。只管杂交瘤技巧出产了很多有价值的单克隆抗体,但必须经过动物免疫、细胞融合及克隆筛选等繁琐、费时的过程。噬菌体展示技巧在体外成功模仿抗体生成过程,不经免疫就可能制备抗体,尤其是单链抗体(ScFv),存在（本文此处忽略..）分子量小,无抗体分子的Fc段,免疫原性低,组织穿透力强以及体内轮回半衰期短等长处。因此,本课题在尚无有效的肺癌干细胞特异性抗体的制备方法的情况下,拟采取噬菌体展示技巧探讨制备人源化肺癌干细胞抗体的新道路,使之成为靶向肺癌干细胞的一种有效方法。目标通过噬菌体名义展示技巧构建鼠抗人EpCAM单链抗体(ScFv),初步研究其免疫活性,为后续课题构建肺腺癌噬菌体抗体库跟筛选肺腺癌干细胞特异性抗体做好前期实验工作。方法1.在Genbank查问鼠抗人EpCAMVH、VL序列,设计EpCAMScFv;2.采取噬菌体展示技巧构建鼠抗人EpCAMScFv;3.随机挑取重组pCANTAB-5E/EpCAMScFv进行测序分析验证;4.采取ELISA方法、免疫细胞化学方法检测EpCAMScFv的免疫活性。成果（此处忽略..）1.成功设计并合成了EpCAMScFv序列;2.成功进行了EpCAMScFv的噬菌体名义展示;3.对挑取克隆进行筛选并制备单克隆噬菌体抗体,用ELISA及免疫细胞化学方法测定其抗原结合活性及特异性,筛选后的单链抗体能与肺腺癌A549细胞及A549干细胞样细胞特异性结合。论断1.用噬菌体展示技巧成功制备了针对上皮细胞抗原的单克隆噬菌体抗体EpCAMScFv,较传统的免疫动物方法更具简便、省时等长处。2.EpCAMScFv单链抗体存在良好的免疫活性,可望成为靶向检测上皮来源的肿瘤细胞乃至癌干细胞的有用工具,并为下一步构建肺腺癌噬菌体抗体库以筛选肺腺癌干细胞特异性抗体打下了良好的前期实验基本。

以上为本篇毕业论文范文噬菌体展示EpCAM单链抗体的制备及其靶向肺腺癌细胞的初步研究的介绍部分。

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