CAEV p28蛋白的原核表白及CAEV感染山羊卵巢颗粒细胞的研究

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CAEV p28蛋白的原核表白及CAEV感染山羊卵巢颗粒细胞的研究

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毕业论文范文题目：CAEV p28蛋白的原核表白及CAEV感染山羊卵巢颗粒细胞的研究，论文范文关键词：CAEV p28蛋白的原核表白及CAEV感染山羊卵巢颗粒细胞的研究
CAEV p28蛋白的原核表白及CAEV感染山羊卵巢颗粒细胞的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：山羊关节炎-脑炎(CaprineArthritisEncephalitis,CAE)是由反转录病霉科慢病毒属山羊关节炎-脑炎病毒(CaprineArthritisEncephalitisVirus,CAEV)引起的山羊的慢性感染病。CAE的典范症状是山羊羔脑脊髓炎跟成年山羊多发性关节炎、硬结性乳房炎以及间质性肺炎。该病呈寰球分布,英国、美国等发达国度更为重大,我国于1982年进口种山羊时传入本病,该病对山羊种群造成的经济丧失是惨重的。然而目前,对该病的防备与把持还是世界各国所面临的困难。为了在我国更好地防备跟把持本病的产生跟风行,树破一种疾速、简单、坚固的检测CAEV的诊断方法,本实验在大肠杆菌中引诱表白了CAEVp28特异性蛋（略..）白,并用该蛋白作抗原树破了间接ELISA检测方法,用该方法对100份本室保存血清进行了检测。首先利用山羊关节滑膜细胞成功繁殖了山羊关节炎-脑炎病毒后,参照GenBank发表的基因序列,设计合成一对带有酶切位点的引物,对CAEV甘肃株p28基因进行PCR扩增,并进行了分子克隆,利用pET表白载体成功实现了p28基因在大肠杆菌中的表白。重组蛋白氨基端带有6个组氨酸标签,利用固定化金属离子亲跟层析法进行纯化,免疫印迹实验证明该重组蛋白存在良好的抗原性跟特异性。以纯化蛋白作为诊断抗原树破了间接ELISA诊断方法,断定其最佳工作前提为重组抗原每孔包被0.1μg,阳性血清以1:50倍稀释,辣根过氧化物酶标记兔抗山羊IgG(HRP-兔抗山羊IgG)以1:（此处忽略..）1000倍稀释,HRP-兔抗山羊IgG最佳作用时光为2h,断定标准为P/N值人于2,且OD值在1.0左右的血清为阳性,否则判为阴性;同时用纯化的p28蛋白免疫小鼠,制备阳性血清。利用重组蛋白抗原检测3只CAEV攻毒后山羊血清抗体程度时发明,3只山羊均在接种2周后可产生p28蛋白的相应抗体,此抗体始终持续存在且滴度较高。在分辨以p28蛋白做抗原的琼脂糖免疫扩散实验(AGID)成果跟间接ELISA实验成果对比中发明,攻毒山羊在接种5周后用两种方法都可检测到血清抗体,但琼扩方法检测到抗体的最早时光比ELISA方法检测到抗体的最早时光要迟3周,而且琼扩方法在检测攻毒后第6个月山羊血清时为阴性,而ELISA方法检测成果为阳性,一方面阐明表白的p28蛋白抗原性好,另一（文章此处忽略..）方面也阐明用琼扩方法可能检测到的p28抗体程度要比ELISA方法可能检测到的p28抗体程度高,ELISA诊断方法比琼扩诊断方法有高的敏感性。重组抗原在实际利用中共检测100份血清样品,67份抗体检测呈阳性。咱们晓得CAEV可能在山羊关节滑膜、胎肺、眼角膜细胞上繁殖,但最近国外有报道称:CAEV在山羊卵巢颗粒细胞上也可能繁殖,而且山羊卵巢颗粒细胞常常被用于体外卵母细胞成熟,同时多少乎所有的产业化国度山羊种群都高度感染CAEV,而且很多不明来源的卵母细胞被用作体外山羊胚胎出产,所以咱们认为作为豢养层细胞的颗粒细胞可能是山羊胚胎感染CAEV的重要来源,因此,颗粒细胞是否被CAEV感染是咱们断定山羊胚胎感染CAEV的道路提供一条新的线（本文此处忽略..）索。为此,本研究进行了CAEV在山羊卵巢颗粒细胞上的感染性实验。对山羊卵巢颗粒细胞进行原代培养,传代2-3代当前,接种CAEV,察看细胞病变,提取病变细胞核酸后,用设计好的的针对CAEVp28基因的引物进行PCR扩增,扩增出一条660bp的片段,经过序列分析后,断定为p28基因,证明CAEV基因组已整合到颗粒细胞基因组上;用上口实验中制备的p28蛋白免疫小鼠获得的阳性血清对病毒在颗粒细胞上的培养物进行CAEV特异性蛋白的免疫印迹实验,发明培养物中有CAEV特异性p28蛋白,证明整合到颗

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