肠道病毒71型荧光RT-PCR检测方法的树破及评估

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肠道病毒71型荧光RT-PCR检测方法的树破及评估

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毕业论文范文题目：肠道病毒71型荧光RT-PCR检测方法的树破及评估，论文范文关键词：肠道病毒71型荧光RT-PCR检测方法的树破及评估
肠道病毒71型荧光RT-PCR检测方法的树破及评估毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目标肠道病毒71型(Enterovirus71)是引起手足口病(HFMD)的重要病原,大都是幼儿感染,引起发热,典范症状是在手心、脚心、口腔以及臀部呈现多个水泡溃疡。还会引起无菌性脑膜炎、脑干脑炎跟脊髓灰质炎样麻痹等神经体系症状，会导致重大的并发症跟后遗症,甚至逝世亡。EV71经典的诊断方法“金标准”是病毒培养分别。然而这种方法须要多少个礼拜的时光,而且会因为病毒滴度低或者抗原漂移而妨碍。分子生物学方法如PCR技巧，以用于特异性的检测EV71核酸,而且被证明比病毒分别方法更灵敏。最近,荧光PCR实验室病毒（此处忽略..）的鉴定上已得到广泛认可,因为它高灵敏性特异性,能疾速检测。通过荧光的发射在扩增反应过程中的实现了实时检测。跟着EV71致的手足口病引起越来越多的关注,急切须要一种疾速而特异的方法检测出EV71,并能与其它肠道病毒辨别,比方CA16,埃可病毒等。本文树破一种荧光RT-PCR技巧,疾速、敏感的从临床标本中检测EV71的DNA。方法根据GeneBank发表的EV71全基因组序列,设计特异的引物与探针；用RT-PCR扩增出226bp的片段,通过纯化后,转化入PGM-T载体中(TA克隆),构建了重组质粒。PCR鉴定DNA（文章此处忽略..）测序证明构建质粒成功。以构建的重组质粒为模板,优化最佳反应前提跟反应体系,树破最优化的实时定量PCR方法。评估其灵敏性、特异性跟坚固性,并用于检测临床标本,同时与传统RT-PCR跟病毒分别检测方法比较评估其利用价值。成果1.经TA克隆成功地构建了重组质粒。2.以重组质粒为模板,断定定量RT-PCR反应体系如下：RT-PCRBuffer10μl;EXTaq-HS0.2μl;RTEnzymeMix2.0μl；引物0.8μl；探针0.4μl；模板RNA2.0μl总体积为20μl。反应前提：42℃5min;95℃10sec;95℃5sec,（文章此处忽略..）60℃30sec；40cvcles;60℃10min.3.方法学的评估成果：绘制了以模板拷贝数为分析指标的定量标准曲线,相干方程为r值为0.994,线性范畴较宽(102～108copies/μl1),。敏感性：54份经测序鉴定后,断定为EV71的标本,用构建的荧光RT-PCR法方法检测均为阳性。本方法绝对检测低限(即能被检测到的模板起始拷贝最低数)为102拷贝/μl,传统的RT-PCR检测方法绝对检测低限为104拷贝/μl,进步了100倍。特异性检测成果：CA16、埃可病毒、轮状病毒、乙脑病毒等无特异性扩增。坚固性：不同时光检测同一份标本的变异系数小于11%。4.对临床（此处忽略..）标本进行检测,荧光RT-PCR法的检测EV71的阳性率是61.2%。病毒分别法跟个别RT-PCR法检测的阳性率分辨是是16.4%、52.4%。论断本研究树破的肠道病毒EV71-TaqMan荧光定量PCR方法,存在特异、灵敏、疾速的特点,实用于由EV71感染引起的手足口病等的实验室诊断。

以上为本篇毕业论文范文肠道病毒71型荧光RT-PCR检测方法的树破及评估的介绍部分。

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