GRIM-19引诱子宫颈癌细胞中p53蛋白积聚的机制研究

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GRIM-19引诱子宫颈癌细胞中p53蛋白积聚的机制研究

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毕业论文范文题目：GRIM-19引诱子宫颈癌细胞中p53蛋白积聚的机制研究，论文范文关键词：GRIM-19引诱子宫颈癌细胞中p53蛋白积聚的机制研究
GRIM-19引诱子宫颈癌细胞中p53蛋白积聚的机制研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景子宫颈癌是女性生殖体系三大恶性肿瘤之一,重大威胁着妇女健康跟生命,目前,子宫颈癌发病率居高不下,且发病年纪趋于年青化。高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)持续感染是子宫颈癌产生的最重要危险因素之一,寻找新的拮抗HR-HPV感染医治子宫颈癌的方法火烧眉毛。以基因医治为代表的生物医治目前已成为继手术、化疗、放疗之后针对恶性肿瘤的第四种医治模式,其中基因医治是将目标基因用基因转移技巧导入靶细胞,使其表白此基因并获得特定的功能,继而履行或介导对肿瘤的杀伤跟克制造用,从而达到医治目标。目前,基因医治已成为子宫颈癌医治的新趋势,然而有效的基因医治依附于外源基因高效而牢固的表白,因此,抉择合适、有效的靶基因成为目前针对子宫颈癌基因医治的重要任务。p53是抑癌基因,定位于17p13.1,全长16~20kb,编码分子量为53kD由393个氨基酸组成的核内磷酸化蛋白,在子宫颈癌组织中表白降落,且以野生型为主。野生型p53重要存在调节细胞周期、克制肿瘤细胞成长、促进肿瘤细胞凋亡等功能。具体重要通过调节p21基因的表白阻滞细胞周期,调控NFκB-Bcl-2道路克制细胞的成长,调节下游靶基因PUMA、NOXA、Perp来促进肿瘤细胞产生凋亡。子宫颈癌细胞中HR-HPV编码的E6蛋白通过克制宿主细胞抑癌基因p53的功能,引起细胞癌变。因此,p53在子宫颈癌细胞中的表白降落或功能失活是子宫颈癌发病的重要因素之一。显然,进步p53的表白或者恢复p53的功能是子宫颈癌医治的重要策略。GRIMs(genesas（略..）sociatedwithretinoid-IFN-inducedmortality)是最近发明的一群参加烦扰素(interferon,IFN)跟维甲酸(retinoicacid,RA)合并引诱的细胞凋亡基因,是Kalvakolanu用反义RNA敲除技巧在乳腺癌细胞中筛选鉴定并首先报道的凋亡蛋白。Grim-19属GRIMs家族成员,是参加细胞线粒体的呼吸作用跟调控细胞凋亡的新基因,定位于19p13.2,该区的多种基因为前列腺癌的克制基因。编码含144个氨基酸残基的蛋白质,分子量约16kD,表白于人体多种畸形组织中,重要定位在线粒体,细胞核也有少量表白。研究发明GRIM-19的表白促进了细胞的凋亡,其表白降落或位点渐变可能导致细胞的异样增殖跟恶性转化。很多肿瘤中,如甲状腺肿瘤、肾癌、口腔癌、结直肠癌等中均发明GRIM-19表白的降落。STAT3在很多肿瘤中处于持续激活状况,是肿瘤医治的新靶点。目前研究认为GRIM-19是STAT3表白跟激活的负性调节子,GRIM-19与其结合后,克制其激活引起的下游基因的转录。然而GRIM-19在子宫颈癌细胞产生、发展中所发挥的具体作用尚不明白。本课题组率先对子宫颈癌细胞中GRIM-19的表白及功能进行了相干研究。研究发明,子宫颈癌组织中GRIM-19表白明显降落,树破牢固表白GRIM-19的HeLa细胞株,命名为HeLa/GRIM-19细胞,体内体外实验中均证明,GRIM-19存在克制STAT3活性,阻滞细胞成长,促进细胞凋亡的重要作用。鉴于之前研究成果已断定子宫（略..）颈癌组织中GRIM-19表白降落,且GRIM-19存在克制子宫颈癌细胞成长,促进其凋亡的作用;而p53蛋白在子宫颈癌的发病机制中存在重要抗肿瘤、促细胞凋亡作用。因此,咱们探讨了子宫颈癌细胞中GRIM-19对p53基因表白的影响。发明,GRIM-19表白的恢复存在引诱p53蛋白积聚的作用,并且积聚的p53蛋白存在克制子宫颈癌细胞增殖的功能。目标研究GRIM-19对p53基因表白的影响及分子机制,为子宫颈癌的医治提供实际根据及医治线索。方法⑴采取WesternBlot方法检测刹时转染pGRIM-19后子宫颈癌细胞株HeLa细胞中p53及下游靶基因p21、PUMA的蛋白表白;⑵利用siRNA沉默GRIM-19后,采取WesternBlot方法检测子宫颈癌细胞株HeLa细胞中p53及下游靶基因p21、PUMA的蛋白表白;⑶采取WesternBlot方法检测刹时转染pGRIM-19后子宫颈癌细胞株SiHa、CaSki细胞中p53及下游靶基因PUMA的蛋白表白;⑷利用siRNA沉默GRIM-19后,采取WesternBlot方法检测子宫颈癌细胞株SiHa、CaSki细胞中p53及下游靶基因PUMA的蛋白表白;⑸采取WesternBlot方法检测刹时转染pGRIM-19或GRIM-19siRNA后卵巢癌细胞株HO8910细胞中p53蛋白的表白;⑹利用Thymidine同步化后,采取流式细胞仪检测牢固表白GRIM-19的HeLa细胞周期的变更;⑺采取FQ-PCR方法检测刹时转染pGRIM-19后HeLa细胞中p53mRNA的表白;⑻采取报告基（此处忽略..）因检测刹时转染pGRIM-19后HeLa细胞中p53启动子的激活情况;⑼利用siRNA沉默STAT3后,采取WesternBlot检测HeLa、SiHa细胞中p53蛋白的表白;⑽采取WesternBlot检测刹时转染STAT3C及STAT3DN后子宫颈癌细胞株HeLa、SiHa细胞中p53蛋白的表白;⑾利用CHX处理后采取WesternBlot检测牢固表白GRIM-19的HeLa细胞中p53蛋白半衰期的变更。成果⑴WesternBlot检测成果显示刹时转染pGRIM-19后HeLa细胞中p53及下游靶基因p21、PUMA的蛋白表白较对比组明显升高,差别有统计学意思,p0.05;⑵WesternBlot检测成果显示通过siRNA沉默GRIM-19后HeLa细胞中p53及下游靶基因p21、PUMA的蛋白表白较对比组明显降落,差别有统计学意思,p0.05;⑶WesternBlot检测成果显示刹时转染pGRIM-19后SiHa、CaSki细胞中p53及下游靶基因PUMA的蛋白表白较对比组明显升高;⑷WesternBlot检测成果显示通过siRNA沉默GRIM-19后SiHa、CaSki细胞中p53及下游靶基因PUMA的蛋白表白较对比组明显降落;⑸WesternBlot检测成果显示刹时转染pGRIM-19或GRIM-19siRNA后HO8910细胞中p53蛋白的表白较对比组均无明显变更;⑹流式细胞仪检测成果显示牢固表白GRIM-19的HeLa细胞周期较对比组细胞明显阻滞于G1期;⑺FQ-PCR检测成果显示刹时转染pGRIM-19后p53mR（本文此处忽略..）NA表白程度较对比组则无明显变更,差别无统计学意思,p0.05;⑻报告基因检测成果显示刹时转染pGRIM-19后p53的启动子较对比组无明显激活,差别无统计学意思,p0.05;⑼WesternBlot检测成果显示通过siRNA沉默STAT3后HeLa、SiHa细胞中p53蛋白表白较对比组无明显变更;⑽WesternBlot检测成果显示刹时转染STAT3C及STAT3DN后HeLa、SiHa细胞中p53蛋白表白较对比组无明显变更;⑾CHX处理后WesternBlot检测成果显示牢固表白GRIM-19的HeLa细胞中p53蛋白的半衰期较对比组细胞明显延长,差别有统计学意思,p0.05。论断GRIM-19存在引诱HR-HPV感染的子宫颈癌细胞中p53蛋白积聚的作用,且积聚的p53蛋白存在克制子宫颈癌细胞增殖的功能;该调控作用既不是直接作用,也不是通过克制STAT3间接克制p53基因的转录跟翻译,而是通过克制p53蛋白的降解,延长了p53蛋白的半衰期。

以上为本篇毕业论文范文GRIM-19引诱子宫颈癌细胞中p53蛋白积聚的机制研究的介绍部分。

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