HCMV先本性埋伏感染Balb/c小鼠免疫功能检测及pp65截短抗原在肾移

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HCMV先本性埋伏感染Balb/c小鼠免疫功能检测及pp65截短抗原在肾移

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毕业论文范文题目：HCMV先本性埋伏感染Balb/c小鼠免疫功能检测及pp65截短抗原在肾移，论文范文关键词：HCMV先本性埋伏感染Balb/c小鼠免疫功能检测及pp65截短抗原在肾移
HCMV先本性埋伏感染Balb/c小鼠免疫功能检测及pp65截短抗原在肾移毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目标第一部分HCMV先本性埋伏感染Balb/c小鼠免疫功能检测:对HCMV先本性埋伏感染Balb/c模型小鼠进行病毒再激活处理后,采集鼠外周血进行HCMV感染状况及免疫功能状况检测,以期摸索该小鼠模型在临床相干疾病中的利用价值。第二部分pp65截短抗原在肾移植标本检测中利用的研究:对肾移植患者HCMV感染状况进行检测,分析比较本室自制pp65ELISA试剂盒的特异性跟敏感性,以期评估其在临床上的实用价值。方法第一部分:随机选取先本性埋伏感染模型小鼠6只,每只给予腹腔打针环磷酰胺(剂量150mg/kg,每周1次,共3次),使其感染状况成为埋伏感染再激活的状况;实验分组为三组,即:HCMV先本性埋伏感染组(A组)、HCMV先本性埋伏感染再激活组(B组)及HF细胞对比组(C组)24~26月龄雌性小鼠各6只,眼眶取血并引颈处死,利用淋巴细胞分别液分别血液中的外周血单核细胞。分辨作如下实验:(1)病毒分别与鉴定:汲取0.5ml的外周血单核细胞悬液接种HF细胞进行体外细胞共培养的病毒分别;察看4周后,取培养物对HCMVUL83、IE基因进行PCR、RT-PCR跟间接免疫荧光以断定三组小鼠的HCMV感染状况;(2)采取间接ELISA棋盘滴定法筛选各种纯度pp65抗（略..）原的特异性;(3)小鼠免疫状况检测:利用本室自制的pp65作为抗原包被酶标板,进行间接ELISA检测小鼠血清中的HCMVIgG、IgM抗体程度,流式细胞仪检测全血细胞中CD3+/CD4+/CD8+T淋巴细胞亚群数量与比例变更。第二部分:从安徽医科大学第一从属病院及武警病院采集肾移植术后患者77份尿标本、78例血标本,按实验设计分辨作如下处理:(1)HCMV病毒分别:将标本接种至人胚成纤维细胞(HF)上,察看病毒致细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE);(2)采取PCR技巧直接检测标本的HCMVIE、UL54及UL83基因;(3)分辨利用pp65抗原组装的ELISA试剂盒、珠海海泰ELISA试剂盒以及意大利DIESS试剂盒检测77例患者血浆标本;(4)处理数据,分辨将基因检测成果与意大利DIESS试剂盒的检测成果进行比较,以断定其对患者HCMV感染状况诊断中的参比标准诊断试剂盒地位,再以DIESS为参比,分析比较本室pp65试剂盒及国内海泰ELISA试剂盒的特异性跟灵敏度。成果第一部分:(1)HCMV感染状况检测:三组病毒分别成果检测显示:只有B组中的4只小鼠的病毒分别成果可察看到HCMV复制增殖后呈现CPE,该组细胞培养物PCR检测HCMVUL（此处忽略..）83DNA为阳性,间接免疫荧光可察看到苹果绿色阳性信号;上述成果在A组跟C组均为阴性;A组跟B组白细胞直接PCR检测在766bp处均可见到HCMVUL83基因特异性条带,C组为阴性;但RT-PCR检测只有B组4份标本在766bp处显示有HCMVUL83基因的转录产物存在;(2)棋盘滴定显示只有精纯后的pp65作为抗原显示有特异性的反应,最适稀释度为1:40;(3)小鼠免疫状况检测:pp65截短抗原间接ELISA法检测小鼠血清中的IgG、IgM抗体程度,A、B两组小鼠IgG抗体各有6例为阳性,阳性率均为100%,C组为阴性;小鼠IgM抗体仅B组有4只小鼠为阳性,阳性率为66.67%,A、C组均为阴性。流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群显示,小鼠外周血中CD3+细胞比在A、B、C三组中的均值分辨为33.05%±3.39%、6.58%±3.38%、43.18%±1.67%,组间差别有明显性(P0.01);CD4+细胞比在A、B、C三组中的均值顺次为66.08%±1.618%、59.98%±2.29%、65.78%±2.17%,B组跟A组及C组差别均有明显性(P0.01),而在A组跟C组间无明显差别(P0.05);CD8+细胞比在A、B、C三组中的均值顺次为23.26%±2.99%、11.50%±2.79%、18.61%±0.94%,组间差别均有明显性(P0.01);CD4+CD8+细胞比在A、B、C三组中的均值顺次为9.90%±1.04%、16.82%±3.20%、11.92%±1.75%,组间差别均有明显性(P0.05)。第二部分（本文此处忽略..）:(1)HCMV病毒分别成果显示均为阴性。(2)77份肾移植患者血标本HCMVPCR检测HCMVIEDNA,67例为阳性,阳性率为87.0%;HCMVUL54DNA共有9例阳性,阳性率为11.7%,HCMVUL83DNA10例阳性,阳性率为13.0%。78份尿标本HCMVUL83PCRDNA检测共有13份阳性,阳性率为16.7%。(3)以意大利DIESS试剂盒作为参比试剂盒得到海泰HCMVIgM的灵敏度为7.7%,特异性为98.4%;本室pp65HCMVIgM的灵敏度为15.4%,特异性为72.0%。(4)pp65IgG跟IgMELISA试剂盒检测成果均为阳性的标本中有两份标本其余各项检测成果均为阴性。论断(1)因大剂量免疫克制剂的利用,HCMV感染再激活小鼠呈现了细胞免疫克制状况,而在该免疫克制的小鼠群体中,精纯的截短抗原pp65作为包被抗原进行ELISA检测抗体的成果与病毒分别及PCR,RT-PCR检测成果完全一致。提示精纯的pp65截短抗原可用于免疫克制人群的HCMVIgG、IgM检测。(2)78例长期利用免疫克制剂的肾移植患者中,经对HCMV多个基因UL83、UL54、IEDNA检测发明,有9名患者各项检测成果均为阳性,阳性率为11.5%,可断定这些患者浮现HCMV活动性感染;(3)在以DIESSELISA试剂盒为参比试剂盒时,本室pp65ELIS（此处忽略..）A试剂盒其灵敏度为15.4%,较海泰试剂盒高一倍;特异性为72.0%,较海泰试剂盒的98.4%低。(4)基因检测均为阴性的患者标本pp65IgMELISA试剂盒检测成果为阳性,提示患者可能为HCMV原发感染,阳性率为2.6%,该pp65IgMELISA试剂盒有望用来诊断“窗口期”的HCMV原发感染。

以上为本篇毕业论文范文HCMV先本性埋伏感染Balb/c小鼠免疫功能检测及pp65截短抗原在肾移的介绍部分。

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