CD133阳性造血祖细胞对结直肠癌细胞生物学特点的影响

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CD133阳性造血祖细胞对结直肠癌细胞生物学特点的影响

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毕业论文范文题目：CD133阳性造血祖细胞对结直肠癌细胞生物学特点的影响，论文范文关键词：CD133阳性造血祖细胞对结直肠癌细胞生物学特点的影响
CD133阳性造血祖细胞对结直肠癌细胞生物学特点的影响毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景跟目标结直肠癌(colorectalcarcinoma，CRC)是我国常见的消化体系恶性肿瘤之一，而转移是患者的重要致逝世起因。肿瘤转移是一个多步骤、多阶段的复杂过程，转移的肿瘤细胞经历了细胞骨架变更、黏附特点的改变、活动才能的加强及蛋白水解酶表白增加等一系列改变。动物实验最新的研究表明，造血祖细胞与肿瘤转移有着密切接洽，KaplanRN等利用β半乳糖苷酶标记骨髓细胞移植的小鼠Lewis肺癌模型、小鼠B16黑色素瘤模型跟c-myc转基因小鼠自发性淋巴瘤模型发明：VEGFR-1阳性造血祖细胞(vascularendothelialgrowthfactorreceptor-1hemopoieticprogenitorcells，VEGFR-1~+HPC)首先在特定器官构成VEGFR-1~+HPC细胞簇(VEGFR-1~+HPCcellularclusters)，为瘤细胞筹备了易于构成转移的微环境，这些细胞簇构成部位与肿瘤转移常见部位一致。研究表明，VEGFR-1~+HPC充当了肿瘤转移必不可少的细胞书签(cellularbookmarking)或者说特使细胞(envoycells)。VEGFR-1~+HPC并非以前发明的血管内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPC)即VEGFR-2阳性造血祖细胞，腹腔打针VEGFR-2抗体，不能阻断VEGFR-1~+HPC细胞簇构成及瘤转移灶构成，只能限度肿瘤转移灶成长。同时利用VEGFR-（文章此处忽略..）1抗体阻断或剔除VEGFR-1~+HPC，则可能克制预迁徙器官造血祖细胞簇的构成与肿瘤转移。但造血祖细胞在人体肿瘤的重要作用及机制仍不非常明白，且目前尚未在人类肿瘤模型上得到证明，因为脐血来源广泛，获取较轻易，成为骨髓及外周造血干祖细胞的极佳调换来源，咱们选定CD133~+造血祖细胞，在减少其引诱分化的同时，察看其对低转移人大肠癌细胞体内外的增殖跟侵袭作用。CD133是一个目前公认的造血祖细胞名义抗原，在畸形及异样造血跟非造血组织中均有表白，跟着细胞的分化成熟其表白减弱、消散。在畸形造血组织中，如人胚胎、肝脏跟骨髓、脐血、成人骨髓跟外周血CD34~+细胞中都可检测到CD133mRNA，而在其余成熟血细胞均未检测到其表白。同时跟着最新的研究表明，CD133mRNA在外周血中的表白里，实体恶性肿瘤转移患者的表白程度明显高于非转移患者，且以骨转移患者的CD133mRNA表白为著。但这一成果的作用机制重要是因为CD133~+造血祖细胞或者是CD133~+肿瘤干细胞的成果尚不明白。本研究重点探讨CD133~+造血祖细胞对结直肠癌增殖、侵袭及转移的影响，阐明CD133~+造血祖细胞在结直肠癌转移中的重要生物学功能，为揭示结直肠癌转移机制及抗转移医治奠定基本。方法1．CD133~+造血祖细胞的筛选、鉴定及培养由南方病院妇产科提供新鲜脐血标本20例，在脐血采集后6h内，利用CD133~+免疫磁珠，分别出CD133~+造血祖细胞，并分辨予流式细胞仪及免疫细胞染色分析跟鉴定样本量中CD133~+细胞含量，同时在减少引诱CD133~（本文此处忽略..）+分化的同时，培养CD133~+造血祖细胞。2．CD133~+造血祖细胞对结直肠癌细胞生物学特点的影响将CD133~+造血祖细胞与SW480共趋化培养，用MTT法检测肿瘤细胞的增殖及黏附才能的影响，用Transwell小室法检测肿瘤细胞的迁徙才能的变更，用Westemblot懂得VEGFR-1、MMP-2、E-Cadherin的表白情况。察看CD133~+造血祖细胞作用前后细胞增殖、体外侵袭变更。3．利用整体可视化结肠癌转挪动物模型察看共移植效应利用牢固表白绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP)的结肠癌细胞株SW480／EGFP~+；通过结肠癌尾静脉打针的方法树破结肠癌转移模型，利用肿瘤细胞表白EGFP的特点，将CD133~+细胞与SW480／EGFP~+共培养通过尾静脉打针的方法察看肿瘤细胞成瘤才能及体内转移才能的变更，利用组织病理学及分子生物学技巧对结肠癌转挪动物模型进行评估跟鉴定。成果1、CD133~+造血祖细胞的筛选、鉴定及培养由南方病院妇产科提供，脐血标本共20份(其中18份成功提取新鲜细胞，2份失败)，50～80ml／份，枸橼酸抗凝，经产妇跟家眷批准取自足月健康顺产新生儿，新鲜脐血采集后6h内，分别出CD133~+造血祖细胞。从新鲜的脐血中得到的单个核细胞数均匀为(1．48±0．19)×10~7／ml，经CD133磁珠分别体系分别得CD133~+富集细胞的均匀数为(1．33±0．01)×10~5／ml，新鲜脐血单个核细胞中的CD133~+细胞所占比例为(0．8±0．01)％，经流式细胞仪鉴定CD133~+CD34~+细胞纯度达到80％以（本文此处忽略..）上。CD133~+细胞培养一周后，免疫细胞化学染色CD133，显微镜下察看CD133阳性细胞数90％。2、CD133~+造血祖细胞对结直肠癌细胞生物学特点的影响CD133~+造血祖细胞能明显促进SW480细胞的成长(n=60、Z=-6．106、P=0．000)，能促进肿瘤细胞的状况学改变，即肿瘤细胞的核深染，异型明显，细胞呈多角形或不规矩形，能明显促进SW480细胞的迁徙才能；细胞黏附实验表明，含有CD133~+造血祖细胞的实验组其肿瘤细胞的黏附才能明显高于对比组(n=60、Z=-3．679，P=0．000)。利用丙酮积淀法提取细胞总蛋白(即稀释蛋白)检测MMP-2、VEGFR-1及E-Cadherin蛋白表白情况发明实验组中的3种蛋白表白水均匀高于对比组。3、利用整体可视化结肠癌转移裸鼠模型察看共移植效应转染后的结肠癌细胞SW480／EGFP~+牢固、高效的表白绿色荧光蛋白，采取尾静脉打针的方法树破结肠癌可视化转挪动物模型，打针2周后，实验组可见肿瘤转移，对比组未见有转移情况，打针4周后，实验组67％产生转移，对比组仅有一只产生转移，打针6周后，实验组中成瘤转移率为4／6，对比组中的成瘤转移率为1／6。经过生存分析的统计成果表明，实验组的转移率高于对比组(n=6，Breslow测验，P=0．045)。通过分子生物学技巧，发明实验组中MMP-2、VEGFR-1蛋白高表白，而E-Cadherin的表白则逐步减低。论断1、CD133~+造血祖细胞可明显促进人结直肠癌细胞的增殖及侵袭才能，CD133~+造血祖细胞与人结直肠癌细胞裸鼠共移植存在促转移作用，初步证明，人造血祖细胞可能对人结（此处忽略..）直肠癌细胞转移构成存在重要影响。2、CD133~+造血祖细胞可与结直肠癌细胞直接作用，能促进转移相干基因跟血管生成因子MMP-2、VEGFR-1蛋白高表白，同时调节E-Cadherin的蛋白表白，初步表明：CD133~+造血祖细胞的促转移作用可能与转移相干因子MMP-2、VEGFR-1及E-Cadherin的表白有关。本研究的翻新之处1、将人造血祖细胞与结直肠癌细胞株共趋化培养，直接在人癌实验品位揭示了造血祖细胞对结直肠癌细胞的作用。2、将人造血祖细胞与结直肠癌细胞株共趋化培养掉队行人类肿瘤动物模型共移植实验研究。初步证明，CD133~+人造血祖细胞可明显促进人结直肠癌细胞的增殖及侵袭才能，CD133~+造血祖细胞与人结直肠癌细胞裸鼠共移植存在促转移作用，人造血祖细胞可能对人结直肠癌细胞转移构成存在重要影响。

以上为本篇毕业论文范文CD133阳性造血祖细胞对结直肠癌细胞生物学特点的影响的介绍部分。

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